Как разводить бифидумбактерин: Бифидумбактерин сухой лиофилизат 5 доз, показания и противопоказания, состав и дозировка — АптекаМос

противопоказания, побочное действие, дозировки, состав – в справочнике лекарственных средств

Бифидумбактерин сухой при кишечных заболеваниях применяют перорально, а в акушерско-гинекологической практике интравагинально.

С флакона удаляют металлический колпачок и резиновую пробку. Содержимое флакона растворяют кипяченой водой комнатной температуры из расчета 1 чайная ложка на 1 дозу лекарственного средства.

Способ растворения:

• в стакан наливают требуемое количество чайных ложек воды (в соответствии с числом доз, указанных на этикетке тары), затем из стакана переносят во флакон небольшое количество воды для растворения сухой массы. После растворения содержимое флакона переносят в тот же стакан и перемешивают.

Одна чайная ложка растворенного таким образом лекарственного средства составляет одну дозу. Необходимое количество доз (соответственно чайных ложек) выпивают за 20-30 мин до еды. Грудным детям лекарственное средство можно давать непосредственно перед кормлением.

При кишечных заболеваниях длительность курса лечения бифидумбактерином определяется тяжестью клинических проявлений, возрастом больного и составляет 2-4 недели, а в отдельных случаях до 3-х месяцев. С профилактической целью назначают по 5 доз 1-2 раза/сут в течение 1-2 недель.

Новорожденным группы «риска» целесообразно начинать применение лекарственного средства в родильном отделении с первых суток жизни до выписки по 1-2 дозы на прием 3 раза/сут.

При кишечных заболеваниях детям первого полугодия жизни лекарственное средство назначают по 3 дозы на прием 3 раза/сут. Детям второго полугодия и старше — по 5 доз 2 раза/сут.

При возникновении у детей нарушений функций ЖКТ и угрозы язвенно-некротического энтероколита назначают до 10 доз в сут.

При острых хронических воспалительных заболеваниях тонкого и толстого кишечника, колитах и энтероколитах у взрослых рекомендуется по 5 доз 2-3 раза/сут.

В комплексной терапии с антибиотиками и другими антибактериальными препаратами рекомендуется:

• детям до 1 года по 5 доз 2-3 раза/сут, детям старше 1 года по 5 доз 3-4 раза/сут, взрослым по 10 доз 2-3 раза/сут.

Для интравагинального введения бифидумбактерин растворяют выше указанным способом. Полученной взвесью лекарственного средства пропитывают стерильный тампон, который вводят интравагинально и оставляют на 2-3 ч.

При воспалительных гинекологических заболеваниях и предродовой подготовке беременных группы «риска» бифидумбактерин назначают по 5-10 доз 1 раз/сут в течение 5-8 дней под контролем восстановления чистоты вагинального секрета до I-II степени и исчезновения клинических симптомов воспаления. При необходимости курс лечения бифидумбактерином можно повторить.

Инструкция Бифидумбактерин Форте® — компания Аван

Скачать инструкцию (порошки) Скачать инструкцию (капсулы)

Регистрационный номер

Порошок	Капсулы
Р N000361/01	ЛСР-007830/08

Торговое наименование

БИФИДУМБАКТЕРИН ФОРТЕ®

Группировочное наименование

Бифидобактерии бифидум

Лекарственная форма

Порошок	Капсулы
Порошок для приема внутрь	Капсулы

Состав

Порошок	Капсулы
Один пакет содержит: активные вещества: бифидобактерии сорбированные на частицах активированного угля — не менее 50 млн колониеобразующих единиц (5х107 КОЕ), вспомогательное вещество: лактозы моногидрат — до 0,85 г.	Одна капсула содержит: активные компоненты: бифидобактерии, сорбированные на активированном угле — не менее 50 млн колониеобразующих единиц (5х107 КОЕ), вспомогательные вещества: лактозы моногидрат — до 0,20 г.

Описание

Порошок	Капсулы
Порошок от светло-серого до темно-серого цвета с черными частицами угля и возможными вкраплениями бежевого цвета со слабым кисломолочным запахом.	Твердые желатиновые капсулы, корпус капсулы белого цвета, крышечка капсулы голубого цвета. Содержимое капсул — порошок от светлосерого до темно-серого цвета с черными частицами угля и возможными вкраплениями бежевого цвета со слабым кисломолочным запахом.

Фармакотерапевтическая группа

Медицинский иммунобиологический препарат — пробиотик

Код АТХ

A07FA

Биологические свойства

Действие препарата обусловлено высокой концентрацией сорбированных на частицах активированного угля бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum), являющихся антагонистами широкого спектра патогенных (шигеллы, сальмонеллы, золотистый стафилококк и др.) и условно патогенных микроорганизмов (протей, клебсиелла и др.). Микроколонии сорбированных бифидобактерий обеспечивают быстрое восстановление нормальной микрофлоры, которая, являясь естественным биосорбентом, аккумулирует в значительном количестве попадающие извне или образующиеся в организме токсические вещества. Сорбированные бифидобактерии активизируют восстановительные процессы в слизистых оболочках, пристеночное пищеварение, синтез витаминов и аминокислот, усиливают иммунную защиту организма.

Показания для применения

• Дисбактериозы кишечника различной этиологии (в т.ч. вызванные приемом антибиотиков, антибактериальных препаратов, глюкокортикостероидных гормонов, препаратов, оказывающих ульцерогенное действие на желудочнокишечный тракт),
• острые кишечные инфекции установленной (шигеллез, сальмонеллез, стафилококковый энтероколит, ротавирусная инфекция) и неустановленной этиологии,
• пищевые токсикоинфекции.

В составе комплексной терапии заболеваний, сопровождающихся дисбактериозом кишечника:

• хронические заболевания с поражением желудочно-кишечного тракта (язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, панкреатит, холецистит, заболевания печени и желчевыводящих путей, хронические запоры,синдром мальабсорбции),
• аллергические заболевания,
• пневмонии, острые и хронические бронхиты,
• острые респираторные вирусные инфекции,
• инфекционный мононуклеоз,
• воспалительные заболевания урогенитального тракта,
• у больных хирургического профиля в период предоперационной подготовки и после операций на кишечнике, печени, поджелудочной железе для коррекции микробиоценоза кишечника и профилактики гнойно-воспалительных заболеваний.

Препарат применяют для профилактики:

• внутригоспитальных инфекций в родильных домах и больницах,
• дисбактериозов у часто болеющих ОРВИ детей и взрослых.

Капсулы

диарея у больных длительно леченных антибиотиками

Противопоказания для применения

Врожденная недостаточность лактазы. Нарушение всасывания глюкозыгалактозы.

Режим дозирования, курс лечения и способ введения

Препарат применяют детям с рождения (в том числе недоношенным), взрослым всех возрастных групп.
В зависимости от тяжести заболеваний Бифидумбактерин форте® применяют в обычных или увеличенных дозах.

Бифидумбактерин форте® с лечебными целями в обычных дозах:

Порошок	Капсулы
— детям до 1 года по 1 пакету 2-3 раза в сутки, — детям с 1 года и старше по 1 пакету 3-4 раза в сутки, — взрослым по 2 пакета 2-3 раза в сутки.	— детям до года по 1 капсуле 2-3 раза в сутки, — детям с 1 года и старше по 1 капсуле 3-4 раза в сутки, — взрослым по 2 капсулы 2-3 раза в сутки.

Курс лечения при острых кишечных инфекциях и пищевых токсикоинфекциях 5-7 дней, при других заболеваниях 15-21 день (определяется характером и тяжестью заболевания). При необходимости курс лечения можно повторить 2-3 раза, каждый курс проводится через месяц после окончания предыдущего курса лечения.
Больным с хирургической патологией — в течение 3-5 дней до операции и в
течение 10-15 дней после операции:

• детям до 1 года по 1 пакету/капсуле 3 раза в сутки,
• детям с 1 года и старше по 1 пакету/капсуле 3-4 раза в сутки,
• взрослым по 2 пакета/капсуле 3 раза в сутки.

Бифидумбактерин форте® с лечебными целями в увеличенных дозах
назначают детям с 1 года и взрослым.

При острой кишечной инфекции и острой респираторной вирусной инфекции с первых суток заболевания:

Порошок	Капсулы
— детям по 5 пакетов 6 раз в день, — взрослым по 10 пакетов 3 раза в день	— детям по 3-5 капсул каждые 2 часа до 6 раз в день, — взрослым по 10 капсул 3 раза в день.

Курс лечения 1-3 дня в зависимости от тяжести состояния.

Порошок

При инфекционном мононуклеозе: — детям до 3 лет по 3 пакета 3 раза в сутки, курс 5 дней; затем 3 пакета однократно вечером, курс 5 дней, — детям с 3 до 7 лет по 4 пакета 3 раза в сутки, курс 5 дней; затем 4 пакета однократно вечером, курс 5 дней, — детям с 7 до 10 лет по 6 пакетов 3 раза в сутки, курс 5дней; затем 6 пакетов однократно вечером, курс 5 дней, — детям старше 10 лет по 7-8 пакетов 3 раза в сутки, курс 5 дней; затем 7-8 пакетов однократно вечером, курс 5 дней.

При хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта:

• детям по 5 пакетов/капсул 1-3 раза в сутки,

• взрослым по 10 пакетов/капсул 1-3 раза в сутки.

Курс лечения 10-14 дней.

Пациентам с сахарным диабетом необходимо учитывать, что

Порошок	Капсулы
в 5 пакетах препарата содержится 0,35 ХЕ.	в 10 капсулах препарата содержится 1,17 ХЕ.

С профилактическими целями детям до 1 года по 1 пакету/капсуле 1 раз в сутки, всем остальным по 1-2 пакета/капсуле 1-2 раза в сутки.

Порошок	Капсулы
Профилактический курс проводят 10-15 дней 2-3 раза в год.	Для профилактики внутригоспитальных инфекций в родильных домах и больницах препарат применяют 5-l0 дней.

Порошок

Капсулы

Бифидумбактерин форте® принимают во время приема пищи, при необходимости независимо от приема пищи. Препарат перед употреблением смешивают с жидкой пищей, желательно кисломолочным продуктом, или небольшим количеством кипяченой воды комнатной температуры для получения взвеси с частичками сорбента черного цвета. Полученную взвесь (суспензию) следует выпить, не добиваясь полного растворения.

Бифидумбактерин форте® принимают внутрь во время приема пищи, при необходимости независимо от приема пищи, запивая водой или кисломолочным продуктом. Детям и пациентам, которые не могут проглотить целую капсулу, ее вскрывают. Содержимое капсулы смешивают с жидкой пищей, желательно кисломолочным продуктом или небольшим количеством кипяченой воды комнатной температуры для получения взвеси с частичками сорбента черного цвета. Полученную взвесь (суспензию) следует выпить, не добиваясь полного растворения.

Новорожденным и детям грудного возраста препарат можно смешать с материнским молоком или смесью для искусственного вскармливания.

Меры предосторожности при применении

Применение препарата не требует соблюдения специальных мер
предосторожности.

Симптомы передозировки

Случаев передозировки не наблюдалось.

Возможные побочные действия

Не установлены.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

При одновременном приеме Бифидумбактерин форте® форте с витаминами (особенно группы В) действие препарата усиливается. При приеме антибиотиков рекомендованный интервал между приемом антибиотика и препарата Бифидумбактерин форте® форте составляет 3 – 4 часа.

Возможность применения препарата в периоды беременности и грудного вскармливания

Препарат разрешен для применения женщинам в периоды беременности и грудного вскармливания. Особых условий приема нет.

Влияние препарата на способности управлять транспортными средствами, механизмами

Препарат не влияет на способность управлять транспортными средствами, механизмами.

Форма выпуска

Порошок	Капсулы
Бифидумбактерин форте® порошок для приема внутрь, 50 млн КОЕ сорбированных бифидобактерий в пакете из многослойного металлополимерного материала. По 10 или 30 пакетов с инструкцией по применению в пачке из картона. В одном пакете 5 доз.	10, 18, 30 капсул по 5 доз упакованы в банки из полимерного материала. Банка помещается вместе с инструкцией по применению в пачку из картона.

Срок годности

Порошок	Капсулы
2 года.	1 год.

Препарат не пригоден для применения по истечении срока годности, при изменении внешнего вида, при отсутствии или нечеткой маркировке на первичной упаковке, при нарушении герметичности первичной упаковки.

Условия хранения

ХРАНИТЬ В НЕДОСТУПНОМ ДЛЯ ДЕТЕЙ МЕСТЕ.

Порошок	Капсулы
Хранить при температуре не выше 10°С. Нижняя граница температуры не лимитируется.	Хранить при температуре от 2 до 10°С.

Условия транспортирования

Порошок	Капсулы
Транспортирование при температуре не выше 10°C. Допускается транспортирование препарата при температуре не выше 25°C не более 10 суток. Нижняя граница температуры не лимитируется.	Транспортирование при температуре от 2 до 10°С. Допускается транспортирование препарата при температуре не выше 20°С не более 10 суток.

Условия отпуска

Отпускается без рецепта.

Владелец регистрационного удостоверения

Общество с ограниченной ответственностью «АВАН», Россия

Наименование, адрес предприятия-производителя лекарственного препарата

Акционерное общество «Партнер», 19180, Москва, ул. Большая Якиманка, дом 31.

Адрес места производства лекарственного препарата

143981, Московская область, г. Балашиха, мкр. Кучино, ул. Южная, д. 11.

Рекламации на качество или побочное действие препарата следует направлять предприятию-производителю по адресу: Акционерное общество «Партнер» 19180, Москва, ул. Большая Якиманка, дом 31.

Тел.: (495) 925-51-09, факс (495) 765-52-40.

Как давать Бифидумбактерин Форте новорожденному: инструкция и дозировка

Появляясь на свет, маленький человек является главной мишенью для различных вирусов, паразитов и бактерий. Несмотря на то, что природа продумала отличную защиту младенца в первые недели его жизни, в реальности бывает немало случаев, когда иммунитет малыша дает трещину и это обязательно оказывает влияние на состояние грудничка. Особенно уязвимым является желудочно-кишечный тракт. Лучшим вариантом является заселение в систему полезных бактерий, способствующих правильному и безболезненному пищеварению.

Но часто на их месте возникает патогенная микрофлора, которая негативным образом сказывается на состоянии малыша. Вследствие этого появляются колики, вздутие животика, малыш становится беспокойным, нарушается его сон, он срыгивает, отказывается от еды, поэтому его вес не увеличивается. Почти всегда организм грудничка сам решает проблему, вырабатывая большее количество полезных бактерий, таким образом, достигается баланс в желудочке малыша. Причем этот период у разных малышей различается, он быстрее наступает у тех, кто питается грудным молоком. При дисбактериозе обязательно нужно применять Бифидумбактерин.

Можно ли новорожденным детям давать Бифидумбактерин? ↑

Дисбактериоз чаще всего возникает у малышей, имеющих различные патологии в развитии, например, это может быть недоношенный младенец, получивший травму при родах, имеющий малый вес или его мама страдает хроническими заболеваниями инфекционно-воспалительного типа и другое. Если дисбактериоз ярко выражен, а это может сказать только врач-педиатр, осмотревший ребенка и изучивший результаты его обследования, то он назначит препарат, в котором содержатся ферменты, помогающие в переваривании пищи. Такие вещества способствуют воспроизводству полезных бактерий в кишечнике у младенца. А основным компонентом их у новорожденного являются бифидобактерии; как только будет достигнут баланс, малыш перестанет страдать от кишечного расстройства.

По своей сути Бифидумбактерин Форте – это скорая помощь при боли в животике новорожденным, поэтому все вопросы о том, можно ли давать этот препарат младенца, излишни, поскольку он создавался именно для них. Педиатры часто именно это средство и назначают, когда малыша беспокоят сильные колики. После недельного применения препарата вы увидите, насколько лучше станет вашему малышу, он перестанет беспричинно, как вам кажется, плакать по ночам, вскрикивая и пожимая ножки. Ребенок станет лучше есть, с удовольствием гулять, перестанет быть раздражительным и капризным.

Важно применять Бифидумбактерин не в качестве одноразового средства, а регулярно, в течение определенного периода времени. Это поможет добиться результата. Он лечит микрофлору желудочно-кишечного тракта, приводит в нормальное состояние работу этой системы. Его действие более широкого спектра, чем просто избавление от коликов и выведение газов.

Колики будут преследовать малыша и во время первых дней лечения Бифидумбактерином, поэтому маме можно на этот период применять какие-то дополнительные средства, направленные непосредственно на решение проблемы коликов. Но когда в организме малыша проблема микрофлоры кишечника будет решена, вопрос коликов и газов будет снят.

Как давать Бифидумбактерин новорожденному: инструкция ↑

Бифидумбактерин выпускается в разных формах, что достаточно удобно. Он может быть в сухом виде, дозированный по ампулам или флаконам, а может быть порошком в пакетике или в свечах. Сухой препарат – это живые бактерии, которые в процессе производства быть лиофильно иссушены, то есть их по специальной технологии перевели из замороженного состояния в сухое. В такой форме Бифидумбактерина может быть 10х7 живых бактерий, помещенных в молочно-сахарно-желатинову среду, где они выросли.

Применяется препарат при самых разнообразных проблемах, связанных с желудочно-кишечным трактом. Например, это различные дисбактериозы, хронические инфекции, пищевые токсикоинфекции, хронические запоры и кольпиты, синдром нарушенного всасывания, патологии внутренних органов, аллергия, при которой возможен дисбактериоз. Те, кто уже применял этот препарат, отмечают его положительное воздействие как профилактическое средства при мастите у женщины, кормящей ребенка грудью.

• Способов применения Бифидумбактерина достаточно, но малышам рекомендуется разбавлять препарат при кормлении.
• При этом важно провести курс лечения полностью, а не до того времени, когда вам показалось, что проблема уже решена.
• Новорожденному малышу от рождения до полугода следует давать препарат по 1 пакетику сначала 2-3 раза в сутки, после трех дней такого применения, а затем 4-6 раз в сутки при такой же дозе.
• Если речь идет об острых кишечных инфекциях, курс обычно ограничивается неделей.

Бифидумбактерин может назначаться и в других случаях – не только при появлении коликов и дисбактериоза. Если его использовать раз в день по 1 пакетику, то такое решение будет отличной профилактикой. Это когда речь идет о грудничке.

Для детей, которым больше 6 месяцев, можно использовать 1 пакетик в 2 дня. Обязательно при назначении Бифидумбактерина обрабатывать его раствором сосок и ареолу груди кормящей матери. Делать это нужно за полчаса до кормления, использовав раствор 1 пакетика на 15 мл прокипяченной воды.

Важно знать, что если у ребенка имеется лактозная недостаточность, ему нельзя употреблять препарат.

Больших же противопоказаний нет, Бифидумбактерин отлично переносится.

Существуют требования к его хранению, например, он годен в течение года при условии, что хранился в холодильнике.

Как разводить Бифидумбактерин ↑

Следует сразу обратить внимание мам, что доза препарата назначается врачом-педиатром после того, как проведет осмотр ребенка и получит данные его обследования. Для каждого малыша своя доза и частота применения, то, что назначено соседскому новорожденному, вашему грудничку может и не подойти. Даже если вам лечение назначил врач, еще раз посмотрите инструкцию, может быть, по каким-то моментам у вас вопросы, не стесняйтесь, спросите о них у педиатра. Врач назначает препарат, ориентируясь на многие данные ребенка: веса, способа кормления, реакции на средство, степень заболевания, состояние малыша. В некоторых случаях возможно применение Бифидумбактерина форте. Этот препарат отличается от обычного усиленной дозировкой в одной ампуле (флаконе). Такое средство назначают ослабленным детям.

Бифидумбактерин обязательно требует разведения перед употреблением. Поскольку в одном флаконе (ампуле) содержится 5 доз препарата, а в инструкции сказано, что на каждую дозу требуется 5 мл воды или молока, получается, что ребенок должен сразу выпить 25 мл жидкости. Но мамы знают: ребенку трудно сразу выпить такой объем лекарственного средства. В этой связи можно применить чуть меньший объем жидкости. Приготовить препарат легко, следует растворить сухой порошок в теплой, но не горячей, воде и немного подождать до полного его растворения. Хорошо давать раствор за 30 минут до приема пищи, но не каждый ребенок приемлет такой порядок, поэтому можно Бифидумбактерин добавлять непосредственно в смесь при кормлении, если малыш находится на смешанном и искусственном вскармливании.

По окончании курса малыша следует вновь показать педиатру, только после его заключения можно либо продолжить лечение, либо его прекратить.

Бифидумбактерин : инструкция, применение, цена

Бифидумбактерин – это препарат, в состав которого входят бифидобактерии, которые защищают желудочно-кишечный тракт от патогенных микроорганизмов.

Действующее вещество: живые штаммы бифидобактерий Bifidobacterium bifidum № 1. Одна доза содержит не менее 1·10⁷ КОЕ бифидобактерий;

Вспомогательные вещества: сахароза или сахар мелкокристаллический, желатин, молоко обезжиренное или сгущенное нежирное стерилизованное.

Порошок для орального и местного применения.

Основные физико-химические свойства: порошок (кристаллическая или пористая масса) бежевого цвета различной интенсивности или бежевого цвета с сероватым оттенком со специфическим запахом и вкусом. При добавлении воды образует гомогенную взвесь серовато-бежевого цвета.

Упаковка: По 5 или 10 доз во флаконе. По 10 флаконов в пачке.

Бифидобактерии, входящие в состав препарата, борются против патогенных микроорганизмов, проявляя антагонистическую активность по отношению к ним.

Бифидофлора в микробиоценозе преобладает благодаря действию препарата. Также препарат нормализует деятельность желудочно-кишечного тракта. Препарат улучшает обменные процессы и предупреждает развитие заболеваний желудочно-кишечного тракта и их затяжных форм. Повышает неспецифическую резистентность организма.

Препарат предназначен для лечения взрослых и детей. Препарат разрешено применять детям с рождения.

Препарат назначается:

Если есть длительные кишечные дисфункции неизвестного происхождения у детей, при сепсисе и пневмонии, при гнойно-инфекционных заболеваниях, расстройствах функций кишечника у детей.

Также препарат предотвращает развитие язвенно-некротического энтероколита у детей.

Если у детей отягощенное преморбидное состояние, если они родились преждевременно или имеют признаки недоношенности, которые в раннем неонатальном периоде принимают антибиотики.

Если матери имели токсикозы тяжелой формы, экстрагенитальные заболевания или у них был период безводности.

Детям матерей, у которых были трещины сосков, лактостаз, а также в случае, когда после перенесенного мастита было восстановление грудного вскармливания.

Если у детей наблюдается анемия, диатез, рахит, гипотрофия и другие аллергические проявления, а также коклюш и расстройства функций кишечника.

Если младенцы были переведены на искусственное вскармливание или которых вскармливают молоком донора.

Если нарушен биоценоз кишечника у взрослых и детей старшего возраста.

Если женщины, которые кормят, имеют трещины сосков, или они втянуты или плоские, и находятся в родильных домах, где сложная эпидситуация, то препарат применяется для местной обработки молочных желез, также применяется для профилактики мастита.

Если нарушена чистота вагинального секрета до 3 или 4 степени, для беременных в группе риска, если есть бактериальный кольпит, который был вызван кишечной палочкой и стафилококком, также если есть сенильный кольпит гормональной природы.

Повышенная чувствительность к составляющих препарата

Особые меры безопасности

Если целостность упаковки была повреждена, то препарат не следует применять.

Если истек срок годности или изменились физико-химические свойства (масса высушенная, уменьшилась в объеме, цвет темно-коричневый)

Применение в период беременности или кормления грудью

См. раздел «Способ применения и дозы».

Нет информации о случаях передозировки.

Побочные реакции

Побочные реакции могут возникать как результат повышенной чувствительности к компонентам препарата.

Препарат рассчитан на применение в растворенной форме.

В случае наличия заболеваний кишечника препарат должен применяться внутривагинальным путем, внутрь и наружно.

Идеальная температура воды для приготовления раствора препарата составляет 20-25°С. Строго рекомендуется применять кипяченую воду.

Как правильно готовить раствор препарата:

1. Исходя из соотношения 1 доза препарата к 1 чайной ложке воды, следует приготовить раствор в стакане. Количество доз указывается на этикетке препарата.
2. Далее следует перелить ориентировочно 1-2 чайных ложки жидкости назад в флакон и как следует взболтать. Ожидать растворения смеси во флаконе 5 минут.
3. Следующим шагом является переливание смеси из флакона в стакан с раствором и тщательное вымешивание.

Образовавшуюся в стакане смесь нужно принимать чайными ложками, где 1 ложка смеси равняется одной дозе.

Употреблять смесь нужно перед едой, примерно за пол часа. Количество доз (ложек) указано на упаковке.

В случае применения к новорожденным, следует дать ребенку препарат прямо перед кормлением.

Особенности использования средства при выкармливании грудью:

1. Сделать компресс из чистой марлевой салфетки, вымоченной в растворе (для вымачивания использовать 2-3 дозы средства)
2. После подготовки компресса из ватно-марлевой салфетки с применением препарата, необходимо разместить его на поверхности груди на срок от 20 до 30 минут. По истечению срока можно убрать компресс и приступить к кормлению.

Курс обработки груди средством составляет 5 дней.

Дозировка для детей не старше 6 месяцев, в случае кишечных заболеваний, составляет приемы раствора 3 раза в сутки по 3 стандартных дозы.

Для детей, возрастом от 6 месяцев, нормальной дозировкой будет прием 3 раза в сутки по 5 чайных ложек раствора средства.

В случае обнаружения сепсиса, гнойно-инфекционных заболеваний либо пневмонии, следует установить регулярность приема препарата  3 раза в сутки, по 2-3 чайных ложки. Эта дозировка может быть увеличена до 10 чайных ложек за сутки, если у ребенка явственно прослеживается угроза нарушений функций желудочно-кишечного тракта или язвенно-некротического энтероколита.

Если новорожденный находится в группе риска с первых дней жизни, необходимо включить препарат в рацион младенца как можно скорее. Оптимальной дозой  будут 1-2 чайных ложки раствора, три раза за 24 часа.

Дозировки для взрослого отличаются: при нарушениях функции биоценоза кишечника нужно принимать 5 ложек в среднем 2-3 раза в день; профилактика заболеваний кишечника будет успешной при приеме 5 чайных ложек раствора, 1 или 2 раза в день, на протяжении 1-2 недель.

В общем, длительность курса лечения сильно зависит от возраста пациента и  обнаруженных у него симптомов, и может варьироваться, начиная от 4 недель и заканчивая 3 месяцами.

Внутривагинальный вариант лечения средством проводиться с помощью стерильного тампона, который пропитывается препаратом. После пропитывания тампон нужно ввести внутривагинально и оставить на 2 или 3 часа.

Данный метод применения подходит также для проходивших предродовую подготовку беременных и входящих в группу риска и для тех, у кого обнаружено воспаление половых органов. В таком случае дозировка составит 5-10 доз, принимаемых 1 раз в сутки, при курсе лечения 5-8 дней. Сигналом к успеху лечения служит чистота вагинальных выделений, достигающая 1-2 степени и полное исчезновение симптомов воспаления.

Если понадобится, лекарственный курс может быть повторен.

Особенности применения

Препарат нельзя растворять горячей водой и хранить в виде раствора.

Если пациенты не переносят некоторые сахара, то применение препарата необходимо согласовать с врачом.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

Нет исследований по взаимодействию с другими лекарственными средствами.

1 год.

Условия хранения

Препарат рекомендуется хранить в сухом месте, защищенном от света, где температура от 2 до 8 ° С. Хранить в местах, недоступных для детей.

Цена на препарат колеблется от 125 до 149 гривен.

Bifidobacterium Adolescentis — обзор

13.8.1 Здоровье человека

Поскольку люди не производят автохтонных ферментов, разрушающих полисахариды клеточной стенки, арабиноксиланы вносят очень небольшой вклад в перевариваемую энергию. В зависимости от источника и методов приготовления (изоляты против фракций зерна против гидролизатов) арабиноксиланы обладают свойствами растворимой и / или нерастворимой клетчатки. Считается, что водорастворимые арабиноксиланы из-за их загущающих свойств увеличивают вязкость перевариваемого вещества в тонком кишечнике и ухудшают диспергирование и смешивание пищевой массы со слоем жидкости, прилегающим к поверхности слизистой оболочки.Следовательно, арабиноксиланы участвуют в замедлении скорости абсорбции глюкозы и снижении гликемического ответа, а также оказывают положительное влияние на долгосрочное управление весом (Mendis & Simsek, 2014). Было опубликовано несколько интервенционных исследований на людях, изучающих влияние диетических добавок арабиноксилана на гомеостаз глюкозы и инсулина у здоровых людей, а также у лиц с нарушенной толерантностью к глюкозе (Garcia et al., 2006, 2007; Hartvigsen, Gregersen, et al., 2014; Хартвигсен, Лерке и др., 2014 г .; Лаппи и др., 2013; Лу и др., 2000; Лу, Уокер, Мьюир и О’Ди, 2004 г .; Möhlig et al., 2005; Zunft et al., 2004). По данным Европейского агентства по безопасности пищевых продуктов, существует достаточно научных доказательств в поддержку утверждения о том, что «потребление арабиноксиланов (8 г на 100 г доступных углеводов) как часть еды способствует снижению повышения уровня глюкозы в крови после этого приема пищи». (Панель EFSA, 2011 г .; Kellow & Walker, 2018 г.).

Арабиноксиланы не перевариваются в тонком кишечнике, но потенциально являются источником ферментируемого углерода для микроорганизмов, населяющих толстый кишечник.Многочисленные исследования предоставили доказательства того, что и арабиноксиланы, и арабино-ксилоолигосахариды могут усиливать рост потенциально полезных для здоровья бактерий. Кишечные бактерии, которые могут успешно размножаться поли- и олигосахаридами, включают множество видов Bifidobacterium (Bi.) , Bacteroides (B.) , Lactobacillus и Clostridia . Jaskari et al. (1998) и Crittenden et al. (2002) сообщили, что препараты ксилоолигосахаридов (DP 2–5) поддерживали рост многих видов Bifidobacterium и Bacteroides , а также Lactobacillus brevis , но не ферментировались E.coli , Enterococci , Clostridium sp. и большинство Lactobacillus sp. Van Laere, Hartemink, Bosveld, Schols и Voragen (2000) генерировали арабино-ксилоолигосахариды со степенью полимеризации (DP 5–10) и дважды разветвленными остатками ксилозы и наблюдали, что они полностью ферментировались Bi. adolescentis , Bi. longum и B. vulgatus . Bi. longum , Bi. adolescentis и B.ovatus выращивали на интактных арабиноксиланах из пшеницы, но только B. ovatus поддерживались глюкуроноарабиноксиланами из сорго (Grootaert et al., 2007; Van Laere et al., 2000). Длинноцепочечные арабиноксиланы продемонстрировали модуляцию микробиоты просвета и слизистых оболочек, а их присутствие в проксимальном отделе толстой кишки увеличивало Bifidobacterium как в просвете, так и в слизи (Mendez-Encinas et al., 2018).

Ферментация арабиноксиланов кишечными бактериями человека связана с производством короткоцепочечных жирных кислот (SCFA): бутирата, пропионата и ацетата, которые связаны с такими функциями, как гомеостаз кишечника, слабое воспаление и хорошая барьерная функция (Zhang, Чен, Лим, Се и др., 2019). Бутират является предпочтительным источником энергии для клеток слизистой оболочки толстой кишки и вызывает дифференциацию опухолевых клеток и подавление клеточного деления in vitro, тогда как пропионат и ацетат метаболизируются системно. Модификация диеты для лечения заболеваний, связанных с микробиомом кишечника, таких как метаболический синдром и рак толстой кишки, становится популярной (Canani et al., 2011; Mendez-Encinas et al., 2018; Neyrinck et al., 2012). Благоприятное влияние арабиноксиланов и ферментативно продуцируемого AXOS на гликемическую регуляцию также может быть связано с производством SCFA в толстой кишке (Kellow & Walker, 2018).Считается, что SCFA стимулируют выработку кишечных гормонов, пептида YY и глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), которые замедляют опорожнение желудка, снижая скорость, с которой углеводные субстраты, генерирующие глюкозу, достигают кишечника (Delzenne, Cani, & Neyrinck , 2007). Кроме того, постулируется, что бутират оказывает благотворное влияние на поддержание нормальных функций колоноцитов, и предполагается, что пентозаны полезны для толстой кишки человека (Gråsten et al., 2003).

Молекулярная структура арабиноксиланов, а также состав и физическая форма препаратов арабиноксиланов, по-видимому, влияют на их ферментируемость.Нерастворимые в воде арабиноксиланы или незамещенные ксиланы вряд ли перевариваются микрофлорой кишечника. Glitsø и Bach Knudsen (1999), Glitsø, Jensen и Knudsen (2000) и Harris et al. (2005) сообщили, что богатые околоплодником фракции, полученные из ржи и пшеницы, демонстрируют относительно низкую усвояемость животными по сравнению с эндоспермическими или алейроновыми тканями. Обработка щелочью / ксиланазой, экструзия или другая предварительная обработка фракций зерна улучшает скорость и продолжительность ферментации за счет частичной солюбилизации арабиноксиланов (Aura et al., 2005; Glitsø et al., 2000). Было продемонстрировано, что экстрагируемые водой арабиноксиланы с низкой степенью разветвления могут ферментироваться с большей скоростью и степенью, чем их сильно разветвленные аналоги (Glitsø & Bach Knudsen, 1999; Rumpagaporn, Kaur, Campanella, Patterson, & Hamaker, 2012). . Роуз и Инглетт (2010) предложили два различных механизма разложения арабиноксиланов во время ферментации на основе молекулярной структуры этих полисахаридов. Было высказано предположение, что сильно разветвленные арабиноксиланы кукурузы и риса разлагаются по механизму разветвления, тогда как арабиноксиланы пшеничных отрубей разлагаются по двухступенчатому механизму, включающему начальную деградацию незамещенной области ксилана с последующей более медленной деградацией боковых цепей арабинозы.Другое исследование показало, что удаление отдельных ветвей арабинозы и производство слегка замещенных и частично фрагментированных арабиноксиланов кукурузы обработкой щавелевой кислотой поддерживало производство высоких уровней пропионата и бутирата в отличие от ферментации арабиноксиланов нативной кукурузы, которая давала только высокие уровни пропионата ( Румпагапорн и др., 2016).

Водонерастворимая и неферментируемая часть арабиноксиланов, как и другие нерастворимые пищевые волокна, увеличивают объем фекалий и сокращают время прохождения через толстую кишку, таким образом потенциально сокращая время пребывания раздражителей и канцерогенов в толстой кишке и облегчая запоры.Водорастворимые арабиноксиланы псиллиума, известные своими слабительными и снижающими уровень холестерина свойствами (Uehleke, Ortiz, & Stange, 2008), обладают уникальными молекулярными особенностями, которые препятствуют их ферментации кишечными бактериями и отличают их от интенсивно ферментированных арабиноксиланов зерновых культур (Fischer и др., 2004).

Другая полезная роль арабиноксиланов в рационе человека может быть связана с их химиозащитными и антиоксидантными свойствами из-за присутствия гидроксикоричных кислот, связанных с этими полимерами.Несколько исследований показали, что ферулоилированные арабиноксиланы в отрубях обладают сильными противовоспалительными свойствами, ингибируют химически индуцированный канцерогенез у крыс и играют роль в ингибировании перекисного окисления липидов и окисления липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), а также в улавливании кислородных радикалов (Adam et al., 2002; Рондини и др., 2004). Биодоступность и эффективность активных фенольных фрагментов в арабиноксиланах могут быть улучшены, если ферулоилированные олигосахариды высвобождаются из тканей зерна путем частичного ферментативного гидролиза. Katapodis et al.(2003). продемонстрировали, что ферулоиларабиноксилотрисахарид (FAX ₃ ) из пшеничной муки обладал выраженной антиоксидантной активностью в анализе восстановления 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила и ингибировал медь-опосредованное окисление человеческих ЛПНП, тогда как Юань, Ван и Яо (2005) показали, что ферулоилированные олигосахариды из пшеничных отрубей эффективно защищают нормальные эритроциты крысы от гемолиза, вызванного свободными радикалами в условиях in vitro.

Bifidobacterium adolescentis как ключевой член микробиоты кишечника человека в производстве штаммов GABA

Bifidobacterium adolescentis и условиях роста

Все штаммы, использованные в этом исследовании, культивировались в анаэробной атмосфере (10% H ₂ , 10% CO ₂ и 80% N ₂ ) в анаэробной камере MG500 (Don Whitley Scientific, Западный Йоркшир, Соединенное Королевство) на бульоне Де Ман-Рогоза-Шарпа (MRS) (BD-Difco Biosciences, Сан-Диего, CA) с добавлением 0.25% (мас. / Об.) L-цистеина гидрохлорида (Sigma-Aldrich) и инкубировали при 37 ° C в течение различного времени (таблица 1).

Измерение продукции ГАМК

Для определения продукции ГАМК штаммы субкультивировали в MRS с добавлением 2 мМ глутамата натрия (GMS, Sigma-Aldrich) и выращивали в течение 48 часов в анаэробных условиях при 37ºC. Продукция ГАМК оценивалась с помощью ВЭЖХ на бесклеточных супернатантах после дериватизации диэтилэтоксиметиленмалоната (DEEM, Sigma-Aldrich) в соответствии со следующими показаниями: ²⁹ .После центрифугирования (18000 г в течение 10 мин) супернатанты фильтровали через шприцевые фильтры (диаметр 13 мм, размер пор 0,22 мкм, мембрана из PTFE, VWR International, Radnor, PA, USA). Аликвоты по 100 мкл тщательно перемешивали встряхиванием со 175 мкл боратного буфера (1 М борная кислота, pH 9,0), 75 мкл метанола, 3 мкл DEEM и 2 мкл 2-л-аминоадипиновой кислоты (исходный раствор 2 мг / мл ⁻¹ ) (Sigma-Aldrich) в качестве внутреннего стандарта. Смеси выдерживали в ультразвуковой водяной бане при 30 ° C в течение трех 15-минутных циклов.Затем образцы выдерживали при 70ºC на водяной бане в течение 2 ч для удаления избытка ДЭМ. Наконец, образцы центрифугировали в течение 5 минут при 11000 g и супернатанты дополнительно фильтровали через мембраны 0,22 мкм.

ГАМК определяли с помощью обращенно-фазовой (RP) -HPLC в колонке Ascentis C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм), соединенной с предколонкой Supelguard Ascentis C18 (20 × 4,0 мм) (Supelco, Sigma- Олдрич, Сент-Луис, Миссури), используя хроматографическую систему, состоящую из модуля разделения Alliance 2695, детектора УФ-видимого PDA 2996 и программного обеспечения для сбора / анализа Empower (Waters, Милфорд, Массачусетс, США).Разделение проводили при 35ºC с градиентом подвижной фазы: 25 мМ ацетатный буфер pH 6,7 плюс 0,02% азид натрия (элюент A), ацетонитрил (элюент B) и метанол (элюент C) ³⁰ . Образцы (5 мкл) вводили, разделяли при скорости потока 1 мл мин. ^-1 (общий объем рома 100 мин), и ГАМК определяли при 280 нм. Количественную оценку выполняли с использованием внешнего калибровочного шаблона с использованием известных концентраций стандарта ГАМК (Sigma), подвергнутых той же процедуре дериватизации, для получения соответствующего уравнения линейной регрессии (R ² > 0.99). Все определения выполняли, по крайней мере, в двух независимых биологических повторностях.

Секвенирование и сборка генома

На основании результатов, полученных при производстве GABA между 82 штаммами B. adolescentis , два репрезентативных штамма классифицированы как продуценты с высоким GABA, а именно B. adolescentis PRL2019 и B. adolescentis HD17T2H, были подвергнуты секвенированию генома дробовика. ДНК, выделенная из B. adolescentis PRL2019 и B.adolescentis HD17T2H подвергали полногеномному секвенированию с использованием MiSeq (Illumina, UK) в GenProbio srl (Parma, Italy) в соответствии с протоколом поставщика (Illumina, UK). Более того, чтобы улучшить качество генома B. adolescentis PRL2019, его ДНК была извлечена и подвергнута полногеномному секвенированию с использованием подхода MinION (Oxford Nanopore, Великобритания) в GenProbio srl (Парма, Италия) в соответствии с заявлением поставщика. протокол (Oxford Nanopore, Великобритания). Файлы Fastq чтения парных концов, полученные в результате целевого секвенирования генома изолированных штаммов, были использованы в качестве входных данных для сборок генома через конвейер MEGAnnotator ³¹ .Программное обеспечение SPAdes использовалось для сборки de novo каждой последовательности генома Bifidobacterium adolescentis ^32,33 , в то время как открытые рамки считывания (ORF) были предсказаны с использованием Prodigal ³⁴ . Глубина охвата этих недавно выделенных хромосом B. adolescentis варьировала от 91 до 279 раз, что при сборке генерировало 12 контигов и полную хромосомную последовательность, соответственно.

Идентификация локуса антипортера GAD / GABA

Мы получили протеом 1 022 штаммов Bifidobacterium из общедоступной базы данных Национального центра биотехнологической информации (NCBI) (таблица S1).Соответственно, мы оценили, какие виды бифидобактерий кодируют гены, необходимые для продукции ГАМК, с помощью поиска локального сопоставления с аминокислотными последовательностями бифидобактериальной эталонной глутаматдекарбоксилазы NCBI (GadB) и глутамат / ГАМК-антипортер (GadC) (доступ: ADB10338.1 и VEG24324. 1). Предполагаемые белки GadB и GadC из 1022 штаммов Bifidobacterium были идентифицированы с помощью BLASTP (граничное значение E, 1 × 10 ^-30 и 50% идентичность по меньшей мере 80% обеих белковых последовательностей).

Метагеномный скрининг

B. adolescentis и gad

Для исследования присутствия B. adolescentis и выявления присутствия gad генов в микробиоте людей, проявляющих депрессию и тревогу поведения, мы проанализировали два общедоступных набора метагеномных данных, связанных с этими заболеваниями (PRJNA496479 и PRJNA474710). В этом контексте мы собрали метагеномные данные когорты детей младшего школьного возраста с сочетанием субклинических симптомов психического здоровья депрессии и тревоги (PRJNA496479) и хорошо охарактеризованной модели подверженных стрессу крыс Sprague Dawley, демонстрирующих депрессивные — и тревожное поведение из-за социального поражения (PRJNA474710).Каждый набор данных был отфильтрован для получения только высококачественных чтений (минимальный средний показатель качества 20; размер окна 5; порог качества 25; минимальная длина 80) с использованием сценария fastq-mcf (https://expressionanalysis.github.io/ea-utils /). Полученные считывания были сопоставлены с геномами Homo sapiens и Rattus norvegicus с использованием программы Burrows-Wheeler Aligner ³⁵ (алгоритм BWA-MEM с триггером повторного посева, 1,5; минимальная длина семян, 19; оценка соответствия, 1; несоответствие штраф, 4; штраф за открытие пробела, 6; штраф за расширение промежутка, 1) и дальнейшая обработка с помощью программного пакета SAMtools ³⁶ для удаления человеческих и крысинских чтений.Наконец, отфильтрованные чтения были использованы для идентификации B. adolescentis -связанных операций чтения в наборе данных для каждого образца с помощью Bowtie2 ³⁷ посредством сопоставления множественных совпадений и «очень чувствительной» политики. Отображение было выполнено с использованием функции минимального порога оценки (–score-min C, -13,0), чтобы ограничить чтение произвольной длины двумя несоответствиями и сохранить эти совпадения с идентичностью по крайней мере 98% полной длины. Для подсчета числа считываний, соответствующих генам бифидобактерий, использовалось программное обеспечение HTSeq ³⁸ , работающее в режиме объединения.

План экспериментов in vivo

В экспериментах участвовали самцы крыс Groningen дикого типа в возрасте 5 месяцев ( R. norvegicus ). Эта линия крыс, первоначально полученная из Университета Гронингена (Нидерланды), была выведена в помещении для животных Университета Пармы в стандартных условиях. С самого начала экспериментов крыс содержали индивидуально в клетках из полиметилметакрилата (оргстекла) (39 см × 23 см × 15 см). Крыс содержали в помещениях с контролируемой температурой (22 ± 2 ° C) и влажностью (60 ± 10%) и поддерживали в цикле 12/12 свет / темнота (свет включался с 19:00 до 7:00 ч) с едой. и вода без ограничений.Первая неделя представляла собой период акклиматизации, в течение которого крысы продолжали потреблять стандартную пищу с добавлением перорального приема 500 мкл раствора сахарозы (2%) для адаптации к питью из шприца. В течение следующих 5 дней крыс (n = 32) рандомизировали в 4 группы и перорально вводили с помощью шприца: (1) B. adolescentis ATCC15703; (2) B. adolescentis PRL2019; (3) B. adolescentis HD17T2H; (4) только раствор сахарозы (т.е.е., отрицательный контроль) (Таблица S2). Обработку штаммами B. adolescentis ежедневно вводили шприцем из расчета 10 ⁹ КОЕ на крысу. Перед обработкой микробные культуры культивировали, как описано ранее, и образцы фекалий крыс анализировали, чтобы убедиться в отсутствии штаммов B. adolescentis с помощью специальных праймеров. Затем бактериальные культуры собирали центрифугированием (3000 об / мин в течение 8 мин), промывали и ресуспендировали в 500 мкл 2% (мас. / Об.) Раствора сахарозы.Подсчет жизнеспособности каждого инокулята определяли ретроспективным посевом на MRS. Для оценки колонизации бифидобактериями образцы фекалий собирали в четырех различных временных точках. Первый сбор образцов проводили перед пероральным введением бифидобактерий (T ₀ ), чтобы получить доступ к исходной концентрации ГАМК у каждой крысы. Затем мы собрали пробы фекалий на 2, 4 и 7 дней (T ₁ , T ₂ и T ₃ ), чтобы покрыть множественным взятием образцов дни перорального приема бифидобактериальных добавок (рис.4а). До использования фекалии хранили при -80 ° C.

Экстракция ДНК и кПЦР

Экстракцию бактериальной ДНК из образцов фекалий крыс проводили в соответствии с протоколом производителя мини-набора стула QIAamp Fast DNA (Qiagen Ltd, Штрассе, Германия). Наличие бифидобактериальной ДНК оценивали в образцах фекалий крыс. Количественная ПЦР (кПЦР) выполнялась, как описано ранее ³⁹ . Специфичные для штаммов праймеры были разработаны для идентификации различных штаммов B. adolescentis в образцах фекалий.Праймеры Bado_PRL2019_fw (5′-GAGCAGGCAAGGACACTTTC-3 ‘) и Bado_PRL2019_rev (5′-CTGAAGAGGCAAGCTTGAGG-3’) использовали для B. adolescentis PRL2019; праймеры Bado_HD17T2M_fw (5′-CGGCTACAGGTTCGCTTATC-3 ‘) и Bado_ HD17T2H_rev (5′-TTCCGCAGTAATTCGAGCTT-3’) использовали для B. adolescentis HD17T2H; и Bado_ATCC15703_fw (5′-GGTGATTACGCAGCATCCTT-3 ‘) и Bado_ATCC15703_rev (5′-CTTCCTCACAAACGTCAGCA-3’) были использованы для B. adolescentis ATCC15703. Продукты ПЦР детектировали зеленым флуоресцентным красителем SYBR и амплифицировали в соответствии со следующим протоколом: один цикл при 95 ° C в течение 2 минут, затем 42 цикла при 95 ° C в течение 15 с и Tm 62 ° C для B.adolescentis PRL2019, 64 ° C B. adolescentis HD17T2H и 60 ° C B. adolescentis ATCC15703, в течение 30 с. Кривая плавления составляла от 65 ° C до 95 ° C с шагом 0,5 ° C / с. В каждый прогон был включен отрицательный контроль (без ДНК) для каждого набора праймеров.

Экстракция РНК и qRT-PCR

Чтобы оценить экспрессию генов, участвующих в продукции ГАМК, мы извлекли общую РНК из образцов фекалий крыс. 0,4 г образца стула смешивали с 1 мл QIAzoL Lysis Reagent (Qiagen, UK) и переносили в стерильную пробирку, содержащую стеклянные шарики (Merck, Германия).Клетки лизировали на гомогенизаторе Precellys 24 (Bertin instruments, Франция). Протокол предусматривает 2 мин перемешивания смеси чередование с 2 мин статическим охлаждением; этот шаг был повторен трижды. Клетки центрифугировали при 12000 об / мин в течение 15 мин и верхнюю фазу отделяли. Образцы РНК очищали с помощью набора RNAesy Mini Kit (Qiagen, UK) в соответствии с протоколом производителя. Концентрацию и чистоту РНК оценивали на микролитровом спектрофотометре Picodrop (Picodrop, Великобритания).кДНК синтезировали и очищали с использованием набора iScript cDNAsynthesis (Bio-Rad, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями поставщика. Праймеры, используемые для нормализации данных, были разработаны для генов домашнего хозяйства, то есть rpoB и atpB , как описано ранее ⁴⁰ , в то время как для гена gad B были использованы праймеры GadB_fw (5′-CACATGCTCGCCGATCTATG-3 ‘) и GadB_rev (5’-TCGACCGGCTCATACATACC-3 ‘), тогда как для гена gad C использовали праймеры GadC_fw (5′-GTCTCGCTTCCATTCTGCTG-3′) и GadC_rev (5′-CGAACACATACGACAGGCTG-3 ‘).qRT-PCR выполняли с использованием системы CFX96 (Bio-Rad, Калифорния, США). Продукты ПЦР детектировали зеленым флуоресцентным красителем SYBR и амплифицировали в соответствии со следующим протоколом: один цикл при 95 ° C в течение 2 минут, затем 42 цикла при 95 ° C в течение 15 секунд и 60 ° C в течение 30 секунд. Кривая плавления составляла от 65 ° C до 95 ° C с шагом 0,5 ° C / с. В каждый запуск включали отрицательный контроль (без кДНК) для каждого набора праймеров. Коэффициент экспрессии выбранных генов был рассчитан и проанализирован с использованием программного обеспечения CFX Manager Expression (Bio-Rad, Калифорния, США).

Измерение ГАМК в фекалиях крыс

Фекалии каждой крысы в ​​разные моменты времени разбавляли 1:10 (вес / объем) в воде milli-Q для получения фекальных вод. Каждый образец перемешивали до дезагрегации фекалий и центрифугировали при 5000 об / мин в течение 5 минут, сохраняя фракцию супернатанта. Эту водную фракцию использовали для количественного определения ГАМК с использованием набора GABA ELISA (LDN Diagnostics, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Коэффициент разбавления учитывали при расчете ГАМК.

Статистический анализ

Программное обеспечение SPSS v.25 (IBM, Италия) использовалось для проведения статистического анализа метагеномных данных сегуна тревожных и депрессивных детей и здоровых субъектов (BioProjects PRJNA496479) с помощью теста Стьюдента t . Размер выборки между группами оценивался с помощью Statulator (https://statulator.com/SampleSize/ss2M.html).

Заявление об этике

Все экспериментальные процедуры и протоколы с участием животных были одобрены Министерством здравоохранения Италии и Комитетом ветеринарной помощи и использования животных Пармского университета (номер разрешения 370/2018) и проводились в соответствии с Директивами Совета Европейского сообщества от 22 сентября 2010 г. (2010/63 / UE).

Инфекция гриппа вызывает расширение кишечной популяции эндогенных Bifidobacterium animalis, которые защищают мышей от инфекции | Genome Biology

Клинические признаки и гистопатологические поражения легких различны у мышей, которые умерли или пережили инфекцию гриппа

Чтобы оценить гетерогенность реакции хозяина на грипп, мы заразили мышей C57BL / 6, не содержащих патогенов, вирулентным вирусом. (GX) и аттенуированный (HB) вирус H7N9 с использованием подхода LD ₅₀ (подробности о двух вирусах см. В разделе «Материалы и методы»).Следовательно, мышей C57BL / 6 инфицировали дозой LD ₅₀ вирулентного штамма H7N9 (группа GX), такой же нагрузкой ослабленного вируса (группа HB) или им вводили физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS) (отрицательный контроль). Группа NC). Наблюдали за массой тела и выживаемостью животных, а образцы фекалий собирали ежедневно после заражения. Все мыши в группе GX демонстрировали очевидные клинические признаки инфекции, включая потерю веса, анорексию, дрожь и грубую шерсть. Выживаемость в этой группе составила 53.3% (16/30) (рис. 1а). Напротив, все мыши в группах NC и HB выжили и не проявили явных симптомов инфекции. Кроме того, в зависимости от того, умерли ли они от инфекции или выжили после нее, мышей в группе GX разделили на группу смерти ( n = 14, GX.DG) и группу выживания ( n = 16, GX.SG. ), соответственно. Из группы GX.SG 10 мышей были случайным образом выбраны из 16 мышей в качестве представителя этой группы. Кривые процентилей для веса тела мышей показали, что мыши в группе GX.Группа DG потеряла больше массы тела, чем группа GX.SG (рис. 1b). Для дальнейшей оценки различий между группами GX.DG и GX.SG был проведен повторный эксперимент. На 10-й день после инфицирования мыши из группы GX, которые умерли, сформировали группу GX.DG, тогда как те мыши, которые выжили и начали показывать признаки улучшения, составили группу GX.SG. Действительно, вскрытие и гистологическое исследование показали, что поражения легких у мышей GX.DG были заметно более серьезными, чем у мышей GX.SG мышей (рис. 1c и дополнительный файл 1: рис S1). Взятые вместе, эти результаты продемонстрировали, что мыши, которые умерли или выжили после инфекции с той же дозой вируса гриппа, имеют явно разные клинические признаки и очевидные гистопатологические различия, что представляет гетерогенный ответ на инфекцию и подтверждает, что подход LD ₅₀ может быть использован для различать индивидуальные реакции на инфекцию.

Рис. 1

Гетерогенность реакции мышей на инфекцию гриппа тесно связана с микробиотой кишечника. a , b Мышей SPF C57BL / 6 интраназально инфицировали LD ₅₀ дозой вирулентного штамма вируса H7N9 GX ( n = 30, 50 мкл / мышь), такой же дозой ослабленного вируса H7N9. штамм HB ( n = 10,50 мкл / мышь) или вводили равный объем PBS (группа NC) ( n = 10,50 мкл / мышь). a Выживаемость мышей. b Похудание мышей. На основании выживаемости мышей, инфицированных GX, разделили на группу, пережившую инфекцию (GX.SG) и группа, скончавшаяся от инфекции (GX.DG). Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. c H&E окрашивание легкого мыши. Мышей умерщвляли на 10-й день после заражения в другом повторном эксперименте и собирали легкие. Мыши в группе GX, которые умерли от инфекции, входили в группу GX.DG ( n = 3), а мыши в группе GX, у которых началось улучшение, были определены как группа GX.SG ( n = 3), а также группа HB ( n = 3) и группа NC ( n = 3).Показаны репрезентативные изображения. d Экспериментальная установка для экспериментов FMT. Фекальные микробы были собраны на 3 и 9 дни после инфицирования GX ( n = 20) и были разделены на группы GX.SG ( n = 10) и GX.DG ( n = 10) в зависимости от того, были ли мыши, у которых были взяты образцы, умерли от инфекции или выжили. Мыши SPF, которых лечили раствором антибиотика (ATB) в течение 3 дней, подверглись FMT фекальных микробов, как указано.Через день после FMT мышей инфицировали дозой GX LD ₅₀ . e , f Выживаемость GX-инфекции у мышей после FMT фекалий от GX-инфицированных мышей, полученных на 3-й ( e ) или 9-й день ( f ) после заражения или фекалий NC мышей; выживаемость мышей, которым вводили PBS, до инфицирования GX показана в качестве контроля ( n = 20 мышей на группу). Статистические данные в анализе выживаемости проводились с использованием логарифмического ранга (Mantel-Cox). Все эксперименты проводились как минимум дважды в одинаковых условиях и дали аналогичные результаты.

Перенос фекальной микробиоты от мышей, переживших вирусную инфекцию гриппа, увеличивает устойчивость мышей-реципиентов к гриппу

Чтобы исследовать, существуют ли различия в ответах мышей на Инфекция гриппа связана с микробиотой кишечника, затем мы провели трансплантацию фекальной микробиоты (FMT) (рис.1г). Затем оценивали влияние фекальной микробиоты, перенесенной от мышей, которые умерли или пережили вирулентную инфекцию, на инфицирование вирусом GX у мышей-реципиентов. FMT фекальной микробиоты, собранной у мышей GX.SG на 3 или 9 день после инфицирования, значительно увеличивал выживаемость мышей-реципиентов перед инфекцией гриппа по сравнению с устойчивостью мышей, которым была трансплантирована фекальная микробиота от неинфицированных мышей (донор NC) или которые мышей, получавших PBS (рис. 1e, f). Напротив, FMT фекальной микробиоты, собранной на 9 день после инфицирования из GX.Мыши DG снижали выживаемость мышей-реципиентов после заражения гриппом (рис. 1f). Эти результаты показали, что фекальная микробиота мышей, переживших инфекцию, вероятно, содержит специфические кишечные микробы, обеспечивающие защиту от гриппа.

Микробиота кишечника демонстрирует очевидные дифференциальные характеристики в зависимости от тяжести инфекции гриппа

Чтобы идентифицировать противогриппозные кишечные микробы мышей, которые пережили инфекцию, мы затем использовали секвенирование гена 16S рРНК для анализа фекальной микробиоты мышей ежедневно в течение 16 дней, что длился эксперимент.Для более интуитивного анализа данных образцы из 16 временных точек были сгруппированы по четырем стадиям заражения: стадия 1 (день 0), контроль; 2 этап (1–4 дни) — этап стабильного веса; 3 этап (5–8 дни), этап похудания; и стадия 4 (9-15 дни), стадия смерти. Анализ индекса разнообразия Шеннона показал, что численность и разнообразие бактериального сообщества следовали тенденции к снижению на стадии 4 у мышей GX.DG, но не у мышей GX.SG, HB или NC (дополнительный файл 2: рис S2). Кроме того, анализ основных координат (PCoAs) взвешенных расстояний UniFrac показал заметный сдвиг в структуре микробиомного сообщества в GX.Образцы DG с прогрессированием заболевания, особенно на стадии 4, тогда как в группах GX.SG и HB наблюдался лишь небольшой сдвиг. Напротив, в группе NC сдвига практически не наблюдалось (рис. 2а). Межгрупповой анализ показал аналогичные результаты: кластеризация образцов на последней стадии заражения выявила различия между группой GX.DG и тремя другими группами (дополнительный файл 3: рис. S3).

Рис. 2

Инфекция вируса гриппа изменяет микробиоту кишечника в различной степени у отдельных мышей.Образцы фекалий собирали на 0-15 дни после инфицирования в эксперименте, показанном на рис. 1a, b. Основываясь на выживаемости, мышей, инфицированных GX, разделили на группу, пережившую инфекцию (GX.SG), и группу, которая умерла от инфекции (GX.DG). Все пробы кала также были разделены на соответствующие группы. Группы GX.DG, GX.SG, NC и HB содержали 156, 160, 160 и 160 образцов фекалий для анализа секвенирования гена 16S рРНК соответственно. — PCoA взвешенных расстояний UniFrac среди GX.Группы DG, GX.SG, HB и NC. b Относительное количество типов бактерий в группах GX.DG, GX.SG, HB и NC. c Типы бактерий, демонстрирующие значительные различия в численности (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, критерий Вилкоксона-Манна-Уитни). Для более интуитивного анализа данных ( a — c ) образцы из 16 временных точек были сгруппированы по четырем стадиям заражения: стадия 1 (день 0), контроль; 2 этап (1–4 дни) — этап стабильного веса; 3 этап (5–8 дни), этап похудания; и стадия 4 (9-15 дни), стадия смерти. d Тенденции изменения численности некоторых бактерий на уровне рода

Кроме того, подробный таксономический анализ кишечной микробиоты на уровне филумов выявил очевидные изменения в таксономическом составе бактерий в микробиоте кишечника мышей, инфицированных штаммом GX, особенно у мышей GX.DG (рис. 2b). Некоторые типы демонстрировали сходные тенденции изменчивости в группах GX.DG и GX.SG; например, в обеих группах мышей Elusimicrobia и Proteobacteria стали более многочисленными, чем в группе NC, в то время как Bacteroidetes стали менее многочисленными, чем в группе NC по мере развития инфекции, хотя изменения в численности Elusimicrobia были более заметными (рис.2c и Дополнительный файл 4: Рис. S4). Помимо этих сходств, между группами GX.DG и GX.SG были очевидны некоторые различия: например, во время заражения численность Verrucomicrobia значительно увеличилась только в группе GX.DG, тогда как численность Actinobacteria явно увеличилась только в группе. группу GX.SG по сравнению с группой NC (рис. 2c). Кроме того, тенденции изменения численности Firmicutes заметно колебались, при этом численность GX была выше.DG, чем в GX.SG на третьем этапе после заражения, но наоборот на четвертом этапе (дополнительный файл 4: рис. S4). Эти результаты показали, что заражение вирулентным штаммом вируса H7N9 значительно изменило состав микробиоты кишечника с четкими различиями между группами инфицированных и неинфицированных, а также мертвых и выживших мышей.

Чтобы более подробно изучить влияние инфекции гриппа на микробиоту кишечника, мы провели таксономический анализ микробиоты кишечника на уровне родов.Основываясь на тенденциях изменения кишечных микробов в четырех группах мышей, микробы с различным обилием были разделены на шесть групп (рис. 2d и дополнительный файл 5: рис. S5): (1) бактерии с повышенной численностью только в группе GX.DG. ( Akkermansia , Bacteroides , Parabacteroides , неопознанные Gastranaerophilales , Butyricimonas и неидентифицированные Ruminococcaceae ), (2) бактерии, численность которых сначала увеличилась, а затем уменьшилась только в GX.Группа DG ( Enterorhabdus , Adlercreutzia и Candidatus Saccharimonas ), (3) бактерии с повышенной численностью в группах GX.DG и GX.SG ( Elusimicrobium , [Eubacterium] _coprostanoligenes_group Ruminococcaceae_UCG-005 ), (4) бактерии, численность которых снизилась только в группе GX.DG ( Lachnospiraceae_NK4A136_group , Lactobacillus и Parasutterella ), (5) бактерии, численность которых увеличилась в GX.Группы DG и GX.SG, особенно в группе HB ( Turicibacter и Allobaculum ), и (6) бактерии, численность которых увеличилась в группе GX.SG и уменьшилась в группе GX.DG ( Bifidobacterium ). Анализ показал, что разные роды кишечной микробиоты демонстрируют разные ответы на инфекцию гриппа, с некоторыми общими чертами, присущими отдельным родам, в зависимости от исхода инфекции. Основываясь на корреляции между численностью кишечных микробов и состоянием здоровья инфицированных мышей, мы предположили, что Lachnospiraceae_NK4A136_group , Parasutterella , Lactobacillus и Bifidobacterium могут играть важную роль в защите хозяина от инфекции гриппа.

Bifidobacterium pseudolongum и Bifidobacterium animalis тесно связаны с выживаемостью инфицированных гриппом мышей

Поскольку приведенный выше таксономический анализ показал, что определенные роды бактерий могут влиять на реакцию хозяина на инфекцию, мы перешли к анализу бактерий на видовой уровень. Соответственно, 177 репрезентативных образцов из всех групп, собранных на 0, 2, 5, 8, 9, 10, 11 и 15 дни после инфицирования, были отобраны для анализов метагеномного секвенирования.Для характеристики богатства генов был проведен анализ разрежения. Оценочные значения богатства генов почти приблизились к насыщению во всех группах, что указывает на то, что данные секвенирования имели достаточный охват и что только очень немногие гены могут быть необнаруженными (дополнительный файл 6: рис. S6). Результаты анализа PCoA показали заметный сдвиг в составе микробиоты кишечника в образцах GX.DG на более поздней стадии инфекции (рис. 3a), что согласуется с результатами анализа секвенирования гена 16S рРНК. Это указывает на то, что исходный набор данных можно использовать для значимого анализа изменений численности бактерий на уровне видов.

Рис. 3

Выживаемость инфицированных мышей тесно связана с размножением нескольких видов бактерий. Описание эксперимента ссылается на рис. 2. Из них 177 репрезентативных образцов из всех групп собраны на 0, 2, 5, 8, 9, 10, 11 и 15 дни после заражения (57 образцов из группы GX.DG и 40 образцов из группы GX.DG). образцы каждого из групп GX.SG, NC и HB) были отобраны для анализа метагеномного секвенирования. — PCoA взвешенных расстояний UniFrac среди GX.Группы DG, GX.SG, HB и NC. b Тепловая карта относительного содержания ЦАГ. c , d Сети совместного возникновения, созданные на основе сравнений группы GX.SG с группами GX.DG ( c ) и NC ( d ). Сеть совместной встречаемости, полученная для каждого образца фекалий в соответствии с корреляциями Спирмена, стратифицирована по типу инфекции. Каждый узел в сети указывает на CAG, а размер узла представляет собой среднее относительное количество одного CAG.Были сохранены только CAG, обогащенные в группе GX.SG по сравнению с группой GX.DG или NC (OR> 2). e ROC-кривая окончательной модели случайного леса, построенная с использованием относительной численности 18 CAG, обогащенных в группе GX.SG, по сравнению с группой GX.DG. Статистика AUC — это сводная мера производительности классификатора. Значения AUC, близкие к 1, указывают на то, что высокая частота истинных положительных результатов была достигнута при низкой частоте ложных срабатываний (идеальная производительность), тогда как значения AUC, близкие к 0,5, указывают на случайную производительность. f Важность переменной в соответствии со средним снижением точности случайного классификатора лесов. Среднее снижение точности, полученное после перестановки переменной, показывает важность переменной с точки зрения ее вклада в точность классификатора случайного леса. Переменные с высоким средним снижением точности больше способствуют классификации данных, чем переменные с низким средним снижением точности. г , ч LEfSe Сравнение кишечных микробов на уровне видов между GX.Группы SG и GX.DG ( г ) и группы GX.SG и NC ( час ) на 2-й день после инфицирования

Затем мы проанализировали группы генов совместного изобилия (CAG) всех генов, чтобы выявить какие-либо корреляции между численностью вида и состоянием здоровья хозяина. Всего было идентифицировано 1157 CAG, и 98 из этих групп были аннотированы (дополнительный файл 7: таблица S1). Относительное количество аннотированных CAG в четырех группах мышей показано на рис. 3b. Действительно, ЦАГ, обогащенные группой GX.DG, отличались от таковых в группе NC: первая демонстрировала большее количество Escherichia coli , Bacteroides , Parabacteroides , Streptococcus agalactiae и Helicobacter и меньшее количество бактерий. Lactobacillus (CAG этих бактерий перечислены в Дополнительном файле 7: Таблица S1).Хотя компоненты CAG в группах GX.SG и HB были очень похожи на компоненты в группе NC, были идентифицированы несколько специфических компонентов. Например, группа GX.SG показала большее количество B. pseudolongum и B. animalis , а группа HB была обогащена Lachnospiraceae . Для сравнительного анализа групп GX.SG и GX.DG или групп GX.SG и NC ассоциированные с GX.SG CAG были классифицированы как обогащенные в группе GX.SG (оценка отношения шансов (OR)> 2 ).Для дальнейшей идентификации доминирующих специфических видов в группе GX.SG и их корреляции с серьезностью заболевания была создана корреляционная сеть Спирмена для CAG, обогащенных в группе GX.SG (данные для дней 9-15 показаны на рис. 3c, d. ). По сравнению с группой GX.DG, группа GX.SG показала большее количество 18 CAG (рис. 3c), большинство из которых, как ранее было обнаружено, приносят пользу для здоровья [16, 17]. Кроме того, по сравнению с группой NC, группа GX.SG была обогащена 12 CAG (рис.3г), из которых B. animalis (2 CAG) и Clostridium sp. (2 CAG) были использованы в указанной выше корреляционной сети. Это указывает на то, что эти два вида могут играть важную роль (например, защитную роль) во время заражения гриппом. Затем был использован классификатор случайного леса для классификации групп GX.SG и GX.DG с использованием 18 CAG, обогащенных группой GX.SG по сравнению с группой GX.DG. Десятикратная перекрестная проверка была повторена пять раз, и площадь под кривой (AUC) рабочей характеристики приемника (ROC) использовалась в качестве метода оценки для оценки точности классификатора на наборе данных тестирования (рис.3д). На основе набора тестов была получена средняя AUC 85,39% с 95% доверительным интервалом (ДИ) от 76,77 до 94%, что указывает на то, что эта модель обладает мощным диагностическим потенциалом для прогнозирования прогноза / тяжести инфицированных мышей. Более того, вклад каждой CAG оценивался на основе среднего снижения точности (рис. 3f). Среди 18 проанализированных CAG, CAG, обозначенные как B. pseudolongum (CAG-982 и CAG-979), Lactobacillus sp. (CAG947, CAG944, CAG950 и CAG952) и B.animalis (CAG980 и CAG981) внесла наибольший вклад в идентификацию групп GX.SG и GX.DG. Эти данные дополнительно подтвердили тесную корреляцию между выживаемостью инфицированных мышей и присутствием конкретных бактерий, особенно B. pseudolongum , Lactobacillus и B. animalis .

Далее, чтобы получить подробные различия микробиоты кишечника в каждый момент времени, был проведен анализ размера эффекта (LEfSe) линейного дискриминантного анализа (LDA) (рис.3g, h и Дополнительный файл 8: Рис S7). В день 0 после инфицирования численность кишечных микробов не имеет явных различий между группами GX.SG и GX.DG или NC. Однако численность B. pseudolongum и B. animalis была явно увеличена у мышей GX.SG через 2 дня после заражения по сравнению с их численностью у мышей GX.DG или NC (рис. 3g, h). . Повышенное распределение B. pseudolongum у мышей GX.SG сохранялось на протяжении всего процесса инфицирования, при этом B.animalis также были обнаружены в повышенных уровнях на 10-й и 11-й дни после заражения (дополнительный файл 8: рис. S7). Кроме того, для подтверждения метагеномного анализа была проведена qRT-PCR для обнаружения B. pseudolongum и B. animalis образцов фекалий, собранных в другом повторном эксперименте. Как показано в Дополнительном файле 9: Рис. S8, популяции B. pseudolongum и B. animalis были фактически обогащены GX.SG по сравнению с GX.DG на 2-й и 10-й день после заражения, но не на день 0 после заражения.Они предположили, что различия в численности B. pseudolongum и B. animalis между группами GX.DG и GX.SG были связаны с дифференциальными ответами этих мышей на инфекцию гриппа, а не из-за различий в начальные количества этих кишечных микробов.

На основе объективного закона причинно-следственной связи в причинно-следственной связи, а также на описанных выше экспериментах FMT и характеристиках распределения кишечных микробов в GX.Группа SG, мы предположили, что микробиота кишечника увеличивает устойчивость мыши-хозяина к вирулентной инфекции вируса H7N9 за счет увеличения количества эндогенных B. pseudolongum и / или B. animalis .

Пищевой зонд для микробов, связанных с выживанием, защищает хозяина от гриппа

Чтобы проверить роль B. pseudolongum и B. animalis в устойчивости хозяина к инфекции гриппа, мышей SPF лечили раствором антибиотика (ATB) [ 18], а затем вводили два бактериальных штамма (по одному или в комбинации) через желудочный зонд до инфицирования.Пероральное введение только B. animalis или комбинации двух бактерий значительно увеличивало выживаемость мышей-реципиентов, но введение через желудочный зонд только B. pseudolongum не имело очевидного эффекта (фиг. 4a). Кроме того, потеря веса наиболее явно улучшилась на 6-10 дни после заражения через желудочный зонд комбинацией двух бактерий и несколько улучшилась через желудочный зонд только с B. animalis (рис. 4b). Чтобы устранить любые возможные артефакты (например, остаточную микрофлору), связанные с обработанными ATB мышами, мышам, очищенным от микробов, перорально вводили B.animalis отдельно, комбинация двух бактерий или PBS. Точно так же введение через желудочный зонд только B. animalis и комбинация двух бактерий значительно увеличивали выживаемость стерильных мышей. Единственное различие состоит в том, что у стерильных мышей введение только B. animalis обеспечивало почти такую ​​же защиту, как и комбинированный желудочный зонд, но у мышей, предварительно обработанных ATB, было только половину защиты через желудочный зонд с B. animalis. по сравнению с комбинированным желудочным зондом (рис.4в). Эти наблюдения продемонстрировали, что перенос только B. animalis обеспечивает очевидную защиту от гриппа и что эта защита может быть усилена дополнительным введением B. pseudolongum нестерильным мышам.

Рис. 4

Пероральное введение микробов, связанных с выживанием, защищает реципиента от вирулентной инфекции вируса H7N9. Выживаемость ( a ) и потеря веса ( b ) мышей, получавших раствор антибиотика (ATB), которым вводили микробы, связанные с выживанием, или PBS, а затем инфицировали GX ( n = 20 мышей на группу).Введенные микробы представляли собой только B. pseudolongum , только B. animalis или комбинацию B. pseudolongum и B. animalis . Существенная разница в изменении веса ( P <0,05) наблюдалась только между групповым комбинированным желудочным зондом и PBS через желудочный зонд на 3, 7 и 8 дни. c Выживаемость стерильных мышей, которым вводили B. animalis отдельно ( n = 6), комбинацию двух бактерий ( n = 7) или PBS ( n = 6), а затем инфицировали GX.Титры вирусов ( d ), концентрации цитокинов ( e ) и гистологическое исследование (окрашивание H&E) ( f ) легких мышей, предварительно обработанных ATB, после инфицирования GX. Перед инфицированием предварительно обработанным ATB мышам вводили только B. pseudolongum , только B. animalis , комбинацию двух бактерий или PBS, по 15 мышей в каждой группе. Пять мышей из каждой группы были случайным образом умерщвлены для взятия легких на 0, 3 и 5 дни после инфицирования.Гомогенат легких готовили для определения титров вирусов и концентраций цитокинов. Кроме того, 24 мыши, предварительно обработанные ATB, случайным образом делили на четыре группы и лечили, как описано выше. В дни 0 и 7 после инфицирования случайным образом умерщвляли по 3 мыши на группу. Легкие собраны для гистологического исследования. Показаны репрезентативные изображения. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. Статистические данные об изменениях веса, титрах вирусов и концентрации цитокинов представляли собой двухфакторный дисперсионный анализ.* P <0,05, ** P <0,01. Статистические данные в анализе выживаемости проводились с использованием логарифмического ранга (Mantel-Cox). Все эксперименты были выполнены по крайней мере дважды в аналогичных условиях и дали аналогичные результаты.

Параллельный эксперимент с участием мышей, предварительно обработанных ATB, как описано выше, был проведен для определения титра легочного вируса и уровней цитокинов и для изучения гистологических изменений. На 3-й и 5-й дни после инфицирования титры вируса легких у мышей, которым вводили B.animalis отдельно или комбинация двух бактерий были значительно ниже, чем у мышей, получавших PBS (фиг. 4d). Однако уровни цитокинов в легких мышей, которым вводили только B. animalis или комбинацию двух бактерий, показали разные тенденции между двумя временными точками по сравнению с уровнями у мышей, которым вводили PBS (фиг. 4e): уровни большинство тестируемых цитокинов было значительно повышено в легких мышей, которым вводили только B. animalis или комбинацию двух бактерий на 3-й день после инфицирования; Напротив, на 5 день после инфицирования уровни нескольких цитокинов в этих двух группах, особенно в группе с комбинацией двух бактерий, стали ниже, чем у мышей, получавших PBS.Хотя только уровни IL-6 значительно снизились в крови мышей, которым вводили только B. animalis и комбинацию двух бактерий на 5-й день после инфицирования, большинство цитокинов демонстрировали очевидное увеличение в этих двух группах на 3-й день после инфицирования. (Дополнительный файл 10: Рис. S9). Данные показали, что более низкие титры вируса легких у мышей, которым вводили только B. animalis или комбинацию двух бактерий, по сравнению с таковыми у мышей, которым вводили PBS, сопровождались большей индукцией цитокинов на ранней фазе инфекции H7N9.Это предполагает, что B. animalis , вероятно, защищает хозяев от инфекции гриппа, модулируя иммунный ответ хозяина.

Кроме того, гистологическое исследование показало, что в легких мышей, которым вводили только PBS или B. pseudolongum , на 7 день после инфицирования наблюдались тяжелые патологии, включая застой, инфильтрацию воспалительных клеток и молочные клетки в просвете бронхов, даже альвеолы ​​почти исчезли. Напротив, поражения легких у мышей, которым вводили B.Animalis отдельно или комбинация двух бактерий были явно улучшены (рис. 4f). Это дополнительно подтвердило противогриппозный эффект B. animalis .

B. animalis способствует определенным метаболическим функциям микробиома кишечника для защиты хозяина от инфекции гриппа

Чтобы лучше понять механизм, посредством которого B. animalis опосредует противогриппозный эффект, мы провели функциональное сравнение метагенома микробиом кишечника между GX.SG и GX.DG или группы NC. В целом, 2278 терминов KEGG Orthology (KO) были обогащены в группе GX.SG по сравнению с группами GX.DG или NC (дополнительный файл 11: таблица S2). Характеристики распределения этих членов КО в каждый момент времени показаны на рис. 5а. Сравнение групп GX.SG и GX.DG выявило обогащение терминов KO в группе GX.SG в основном на ранних и поздних стадиях заражения. Однако при сравнении групп GX.SG и NC термины KO, обогащенные в группе GX.SG, в основном наблюдались на ранней и средней стадиях заражения.Кроме того, количество обогащенных членов КО в первом сравнении (1606) было явно выше, чем во втором сравнении (1061). Это свидетельствует о том, что функциональная структура микробиоты кишечника в группе GX.SG была больше похожа на таковую в группе NC.

Рис. 5

Функциональное метагеномное сравнение микробиома кишечника в разных группах мышей показывает, что B. animalis может опосредовать защитный эффект против гриппа посредством определенных метаболических путей. a Распределение всех терминов KO, обогащенных в группе GX.SG, по сравнению с группой GX.DG или NC. Желтым цветом обозначены KO-термины, не относящиеся ни к B. animalis , ни к B. pseudolongum ; зеленый цвет обозначает KO-термины, относящиеся к B. animalis , но не к B. pseudolongum ; красным цветом обозначены KO-термины, относящиеся к B. pseudolongum , но не к B. animalis ; синим цветом обозначены термины KO, относящиеся как к B.animalis и B. pseudolongum . b Функциональный состав KO-терминов, обогащенный на 2-й день после инфицирования в группе GX.SG по сравнению с группами GX.DG и NC, и вклад B. animalis или B. pseudolongum в эти функции. Показаны только термины KO, помеченные номером модуля (M).

Кроме того, обогащенные метаболические пути в группе GX.SG выявлены сравнением между группами GX.SG и GX.DG, а также между группами GX.Группы SG и NC продемонстрировали характеристики распределения, аналогичные тем, которые были обнаружены при анализе терминов KO (дополнительный файл 12: рис. S10). Что еще более важно, на 2-й и 5-й дни после заражения многие термины KO были обогащены в группе GX.SG по сравнению с группами GX.DG и NC (дважды положительные обогащенные термины KO) (рис. 5a), что подразумевает эти KO термины, скорее всего, играют важную роль в защите от гриппа. Наши данные показали, что B. animalis был значительно обогащен GX.SG мышей через 2 дня после заражения по сравнению с мышами GX.DG или NC, но не через 5 дней после заражения (рис. 3g, h и дополнительный файл 8: рис S7), что позволяет предположить, что B. animalis обеспечивает больше противогриппозный эффект через 2 дня после заражения, чем через 5 дней. Таким образом, мы впоследствии проанализировали функциональный состав дважды положительных обогащенных KO-терминов через 2 дня после заражения и вклад B. animalis в эти термины / функции. Как показано на рис. 5b, 39 функций были идентифицированы среди дважды положительных обогащенных терминов KO (здесь были показаны только термины KO, помеченные номером модуля; другие термины KO без номера модуля были перечислены в дополнительном файле 11: Таблица S2) , который включает пять путей, включая метаболизм углеводов и липидов, энергетический метаболизм, обработку информации об окружающей среде, обработку генетической информации и метаболизм нуклеотидов и аминокислот. B. animalis или B. pseudolongum участвует в большинстве из этих 39 функций и во всех пяти путях. Из этих путей биосинтез валина / изолейцина (M00019), биосинтез лизина и путь дегидрогеназы DAP (M00526) и биосинтез кофермента A (CoA) (M00120) уникально обогащены B. animalis . Эти результаты показали, что B. animalis может опосредовать защитный эффект против гриппа за счет стимуляции биосинтеза валина, изолейцина, лизина и КоА.

Пероральное введение валина или внутрибрюшинная инъекция КоА защищает хозяина от гриппа

Для проверки вышеуказанного функционального метагеномного анализа мышам, предварительно обработанным ATB, вводили через зонд валин, изолейцин или лизин или внутрибрюшинно вводили КоА, а затем интраназально заражен вирусом H7N9. Как показано на фиг. 6a, b, f, g, пероральное введение валина или внутрибрюшинная инъекция CoA значительно увеличивают выживаемость мышей-реципиентов и улучшают потерю веса.Напротив, пероральное введение лизина только улучшило потерю веса, а пероральное введение изолейцина не имело никакого эффекта. Эти результаты продемонстрировали, что пероральное введение валина или внутрибрюшинная инъекция КоА может обеспечить защиту от гриппа in vivo. Однако in vitro и валин, и КоА не показали очевидного противогриппозного действия в клетках A549 (дополнительный файл 13: Рис. S11), что позволяет предположить, что противогриппозные эффекты валина и КоА могут быть косвенными. Чтобы лучше понять, как валин и КоА опосредуют противогриппозный эффект in vivo, были проведены параллельные эксперименты на животных.Затем легкие собирали для определения титра вируса, уровней цитокинов и гистологических изменений (рис. 6c – e, h – j). На 5-й день после инфицирования как пероральное введение валина, так и внутрибрюшинная инъекция КоА могут значительно снизить титры вируса и уровни IL-1β, IL-6 и IL-10 в легких и в то же время повысить регуляцию IFN-β и IFN-γ легких. Кроме того, на 7-й день после инфицирования обработка как валином, так и КоА также уменьшала поражение легких по сравнению с лечением PBS. Разница в том, что в день 0 после инфицирования внутрибрюшинная инъекция КоА, очевидно, может индуцировать экспрессию TNF-α, IL-1β, IL-6 и IFN-γ в легких, но пероральное введение валина только стимулирует IFN. -γ.Эти данные предполагают, что противогриппозный эффект валина может быть обусловлен его иммунорегуляторными свойствами после заражения гриппом, в отличие от КоА, поскольку он заранее стимулирует врожденный иммунный ответ.

Рис. 6

Пероральное введение валина или внутрибрюшинная инъекция КоА защищают мышей-реципиентов от заражения вирулентным вирусом H7N9. Выживаемость ( a ) и потеря веса ( b ) мышей, которым перорально (перорально) ежедневно в течение 1 недели вводили 100 мг валина, изолейцина или лизина или того же объема PBS (200 мкл), а затем инфицировали. с вирусом гриппа H7N9 GX ( n = 10 мышей на группу).** P <0,01 (валин по сравнению с PBS), ^## P <0,01 (лизин по сравнению с PBS). Титры вируса ( c ), концентрации цитокинов ( d ) и гистологическое исследование (окрашивание H&E) ( e ) легких мышей, предварительно обработанных валином, после инфицирования вирусом GX. * P <0,05, ** P <0,01 (валин по сравнению с PBS). Выживаемость ( f ) и потеря веса ( г ) мышей, которым внутрибрюшинно вводили инъекцию (т.е.п.) ежедневно в течение 3 дней с 0,2 мг КоА или того же объема PBS (100 мкл), а затем инфицировали вирусом гриппа H7N9 GX ( n = 10 мышей на группу). * P <0,05 (CoA по сравнению с PBS). Титры вируса ( ч ), концентрации цитокинов ( i ) и гистологическое исследование (окрашивание H&E) ( j ) легких мышей, предварительно обработанных КоА, после инфицирования вирусом GX. * P <0,05, ** P <0,01 (CoA по сравнению с PBS). В каждый момент времени по 5 мышей на группу для определения титров вирусов и концентраций цитокинов и по 3 мыши на группу для гистологического исследования.Статистические данные в анализе выживаемости проводились с использованием логарифмического ранга (Mantel-Cox). Статистические данные по изменениям веса и концентрации цитокинов представляли собой двухфакторный дисперсионный анализ. Статистика по титру вируса составила t пробы. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. Для гистологического исследования показаны репрезентативные изображения. Все эксперименты проводились как минимум дважды в одинаковых условиях и дали аналогичные результаты.

Пробиотиков для собак — Американский клуб собаководства

.

Если вы когда-либо ели йогурт с живыми культурами, возможно, вы принимали пробиотик.Этот термин относится к полезным или «дружественным» кишечным микробам (бактериям и дрожжам). В желудочно-кишечной системе всех животных их миллиарды, и они помогают переваривать пищу, борются с потенциальными патогенами, вырабатывают питательные вещества и витамины и укрепляют иммунную систему. Само слово происходит от латинского слова «для» (про) и греческого «жизнь» (био). Пробиотики для собак — это инструмент питания, который следует учитывать для здоровья вашего лучшего друга.

Иногда полезные микробы повреждаются или уничтожаются, что может вызвать расстройство желудка и общее ухудшение здоровья.Если ваша собака страдает диареей или связанными с ней проблемами или кажется, что она болеет чаще других собак без видимой причины, ваш ветеринар может предложить использовать один из методов для увеличения количества полезных бактерий:

• Пребиотики — это питательные вещества, предназначенные для питания и стимулирования роста полезных бактерий, которые уже живут в толстой кишке.
• Пробиотики, также называемые «микробами прямого кормления» органом по регулированию кормов для домашних животных AAFCO (Ассоциация американских чиновников по контролю кормов).

Эти продукты бывают разных форм, в том числе:

• Йогурт или кефир с живыми культурами. Имейте в виду, что не все йогуртовые культуры одинаковы. Некоторые культуры были использованы для производства продукта, но не являются пробиотиками. Предлагайте собаке только несладкий простой йогурт и внимательно читайте этикетки, чтобы избежать использования всех искусственных подсластителей.
• Порошки, например Purina ProPlan FortiFlora
• Капсулы
• Жует
• Корма для собак

Эти продукты обычно содержат виды бактерий, обычно встречающихся в кишечнике собак, например:

• Lactobacillus acidophilus
• Enterococcus faecium
• Bifidobacterium lactis
• Lactobacillus casei
• Bifidobacterium breve

Как покупать пробиотический продукт и уход за ним

Гейл Чарнеки-Молден, Ph.Д., старший диетолог-исследователь компании Nestle Purina и один из разработчиков FortiFlora, говорит, что большая проблема этих продуктов в том, что они являются хрупкими живыми существами. «Когда вы смотрите на пробиотик, вы видите живые бактерии, которые были адаптированы к жизни в желудочно-кишечном тракте», — объясняет она в подкасте Canine Health Foundation. Воздействие воздуха, влаги или экстремальных температур повредит их жизнеспособности. Вот почему некоторые из этих продуктов продаются в отдельных порционных пакетах.Она также говорит, что люди должны помнить о температурных условиях при покупке пробиотических продуктов. «Вы не хотите покупать пробиотики, когда на улице 110 градусов, вы идете в торговый центр на четыре часа, а ваши пробиотики лежат в горячей машине пять или шесть часов. Маловероятно, что пробиотики выживут.

Кроме того, есть несколько вещей, которые вы должны обратить внимание на этикетку упаковки пробиотиков, например:

• Список конкретных пробиотиков в продукте, включая идентификацию штамма.Доктор Чарнеки-Молден указывает на то, что существует несколько штаммов бактерий, и каждый делает что-то свое. Она цитирует исследование, в котором ученые изучали живые микробы — Lactobacillus acidophilus — извлеченные из собачьих фекалий. Из 97 штаммов только 17 имели пробиотическую активность, но не все они были одинаковыми. Некоторые из них проявляли противовоспалительную активность, а другие были иммуностимуляторами. Она отмечает, что пробиотики не обязательно лучше использовать большее количество штаммов или различных форм бактерий, потому что они могут работать друг против друга.По ее словам, из проведенных исследований эффективности пробиотиков большинство было проведено с отдельными штаммами.
• Гарантированный анализ количества живых бактерий в конце срока годности. Некоторые компании могут сказать, сколько живых бактерий содержится в продукте на момент его производства, но к моменту покупки продукта все пробиотики могут умереть.
• Срок годности.

Когда используются пробиотики?

Согласно Ветеринарному руководству Merck, пробиотики

чаще всего назначают для поддержания «желаемого баланса кишечных микробов». Когда животное находится в состоянии стресса или болеет, баланс между здоровыми и болезнетворными микробами может быть нарушен. Это может привести к диарее, газам, спазмам и неприятному запаху изо рта.

Некоторые из факторов, вызывающих такие расстройства пищеварения, включают:

• Инфекция или бактериальный дисбаланс
• Стресс: Как и у людей, изменения, вызывающие эмоциональный стресс, такие как посадка, переезд или потеря дома, могут привести к колиту. Это одна из причин, почему многие собаки в приютах страдают диареей.Некоторые исследования показали, что пробиотики действуют так же, как и антибиотики, при устранении диареи у собак из приюта.
• Диета: это может включать резкие изменения в меню или употребление в пищу испорченной пищи, которая просто не подходит собаке.
• Старость
• Лекарства. Известно, что антибиотики и стероиды длительного приема вызывают диарею, убивая полезные бактерии.
• Паразиты

Вы можете подумать о том, чтобы дать своей здоровой собаке пробиотик, если она склонна к развитию диареи в стрессовых ситуациях.Например, если вы планируете взять собаку на выставку или сесть на нее, возможно, имеет смысл дать пробиотики на несколько дней вперед. Кроме того, щенкам, у которых часто возникает диарея после учебных занятий или посещений ветеринара, например, может быть полезно несколько дней приема пробиотиков при подготовке к стрессовому событию.

Работают ли пробиотики?

Неофициальные свидетельства — истории об индивидуальном успехе — существуют в поддержку эффективности пробиотиков, и некоторые ветеринары ими доверяют.Есть несколько научных исследований о пользе пробиотиков для здоровья человека и животных, а также об усилении иммунных реакций у растущих собак. Одно ирландское исследование 2009 года показало, что добавление определенного штамма Bifidobacterium animalis сокращает продолжительность диареи с семи до четырех дней. Это также устранило необходимость лечения антибиотиками примерно на 10 процентов по сравнению с плацебо.

AKC является участником партнерских рекламных программ, предназначенных для предоставления сайтам средств для получения рекламных сборов за счет рекламы и ссылок на akc.орг. Если вы покупаете продукт по этой статье, мы можем получить часть от продажи.

Пробиотик, который действует дольше, чем микробы йогурта

Вот почему пробиотики, похоже, не влияют на состав микробиома — сообщества микробов, живущих внутри нас. Вот почему эти продукты так не впечатляют с медицинской точки зрения. Самые взыскательные отзывы предполагают, что они полезны для лечения некоторых видов инфекционной диареи, но мало чего другого.И за последнее десятилетие регулирующие органы Европейского Союза были настолько не впечатлены доказательствами, которые стоят за пробиотиками, что запретили все заявления о вреде для здоровья, которые появлялись на упаковке этих продуктов, включая само слово «пробиотик».

Но концепция правильная. Мы знаем, что бактерии в нашем микробиоме важны для нашего здоровья, и что изменения в микробиоме связаны со многими состояниями, включая воспалительные заболевания кишечника, колоректальный рак, диабет и многое другое.Таким образом, может улучшить наше здоровье, принимая правильные микробы. Проблема в том, что мы делаем это грубо и наивно. Это живых существ , а мы — экосистем . Нельзя просто вводить первых во вторую и предполагать, что они закрепятся. Вам нужно знать , почему они могут добиться успеха или потерпеть неудачу.

Вот что начали делать Уолтерс и его команда. Они сосредоточились на специфическом штамме Bifidobacterium longum , который является общей, стабильной и доминирующей частью кишечника человека.Мария Мальдонадо-Гомес из Университета Небраски попросила 23 добровольцев принимать ежедневные дозы B. longum или таблетку плацебо и проверила их стул на предмет наличия ДНК штамма.

У большинства добровольцев бактерия исчезла в течение первого месяца или даже первой недели. Но в трети из них она сохранялась, а в некоторых случаях — более полугода. В отличие от обычных пробиотиков, этот штамм, казалось, прочно обосновался. «Я никогда не ожидал этого», — говорит Уолтерс.«Я думал, что даже с частью нашего основного микробиома наши резидентные штаммы будут конкурировать с новым».

В каком-то смысле да. Сравнивая микробиомы добровольцев, Мальдонадо-Гомес показал, что его штамм B. longum с меньшей вероятностью прижился, если бы у его новых хозяев уже было собственных штаммов B. longum . В этом есть смысл: близкородственные микробы должны быть более похожими и, следовательно, с большей вероятностью конкурировать за одни и те же питательные вещества, ресурсы или жизненное пространство.Если уже присутствует много видов B. longum , то есть несколько ниш, которые должен заполнить входящий штамм.

Мальдонадо-Гомес также обнаружил, что проглоченный штамм с большей вероятностью вымывается, если микробиом добровольцев несет несколько десятков конкретных бактериальных генов, подавляющее большинство из которых участвует в расщеплении углеводов и других питательных веществ. Опять же, это имеет смысл: если местные микробы используют эти гены для переваривания любой доступной пищи, иммигрантскому штамму нечего есть.

Эти результаты показывают, что — возможно превратить проглоченный микроб в постоянную часть кишечника, и они намекают на тип факторов, способствующих успешной колонизации. «Я взволнован, — говорит Уолтерс. «Я думаю, это действительно показывает, что мы можем изменять экосистемы кишечника, внедряясь и устанавливая определенные микробы. Мы не изучали здоровье и все еще пытаемся определить, какие конфигурации микробиома связаны с болезнями. Но если человек пропускает или теряет штаммы, важные для его здоровья, это можно исправить.”

Влияние кормового нейтрализатора на рост Bifidobacterium Bifidum

1. Аруначалам, К. Д. (1999). Rioe of Bifidobcteria в нутрификации, медицине и технологиях. Nutr Res, 19,1559-1597. Поиск в Google Scholar

2. Коста Э, Усалл Дж., Тейксидо Н. и др. (2000). Влияние защитных средств, среды для регидратации и начальной концентрации клеток на жизнеспособность штамма CPA-2 Pantoea agglomerans, подвергнутого сублимационной сушке. Журнал прикладной микробиологии, 89 (5), 793-800.Искать в Google Scholar

3. Degnan, B.A., Macfarlane, G.T. (1995). Использование арабиногалактана в непрерывных культурах Bifidobacterium longum: эффект совместного культивирования с Bacteroides thetaiotaomicron. Anaerobe, 1 (2), 103-112. Искать в Google Scholar

4. Дитрих К., (1998). Технологические аспекты, связанные с микроорганизмами в функциональных продуктах питания. Trends in Food Science & Technology, 9, 295-306 Поиск в Google Scholar

5. Ду, С. П., Янг, К. Х., Ши, Д. (2009). Селекция кислородостойких и кислотоустойчивых штаммов Bifidobacterium bifidum.Modern Food Science and Technology, 25, 916-919.Search in Google Scholar

6. Falony G., Calmeyn T., Leroy F., et al. (2009). Совместные ферментации видов Bifidobacterium и Bacteroides thetaiotaomicron раскрывают механистическое понимание пребиотического эффекта фруктанов инулиноподобного типа. Прикладная и экологическая микробиология, 75 (8), 2312-2319. Поиск в Google Scholar

7. Гомес, A.M.P., Malcata, F.X. (1999). Bifidobacterium spp. и Lactobacillus acidophilus: биологические, биохимические, технологические и терапевтические свойства, относящиеся к использованию в качестве хоботка.Тренд. Food Science & Technology, 10, 139-157. Поиск в Google Scholar

8. Янер, К., Пелаез, К., Рекена, Т. 2004. Казеиномакропептид и концентрат сывороточного протеина усиливают рост Bifidobacterium lactis в молоке. Food Chemistry, 86 (2), 263-267. Искать в Google Scholar

9. Kailasapathy, K., Chin, J. (2000). Выживаемость и терапевтический потенциал пробиотических организмов в отношении Lactobacillus acidophilus и Bifidobacterium spp. Иммунол. Клетка. Биол., 78, 80-88. Искать в Google Scholar

10.Озер, Д., Акин, С., Озер, Б. (2005). Влияние инулина и лактулозы на выживаемость Lactobacillus acidophilus LA-5 и Bifidobacterium bifidum BB-02 в йогурте acidophilus-bifidus. Food Science and Technology International, 11 (1), 19-24. Поиск в Google Scholar

11. Палмфельдт Дж, Радстром П., Хан-Хагердал Б. (2003). Оптимизация исходной концентрации клеток повышает устойчивость Pseudomonas chlororaphis к сушке вымораживанием. Криобиология, 47 (1), 21-29. Искать в Google Scholar

12.Росс, Р.П., Десмонд, К., Фицджеральд, Г.Ф., Стэнтон, К. (2005). Преодоление технологических препятствий в разработке пробиотических продуктов. J.Appl. Microbiol., 98, 1410-1417. Поиск в Google Scholar

13. Санчес Б., де лос Рейес-Гавилан К. Г., Марголлес А. и Геймонд М. (2009). Ферментированное молоко с пробиотиками: настоящее и будущее. International Journal of Dairy Technology, 62, 472-483. Поиск в Google Scholar

14. Шульц, М., Штраух, У.Г., Линде, Х.Дж., Ватцл, С., Обермайер, Ф.(2004). Профилактические эффекты штамма Escherichia coli Nissle 1917 на острое и хроническое воспаление кишечника на двух различных моделях колита на мышах. Clin Diagn Lab Immunol, 11, 372-378. Поиск в Google Scholar

15. Шу Г., Цзи Ли-и., Чен Х. (2011). Влияние стахиозы, ксилоолигосахарида и галатоолигосахарида на рост Bifidobacterium bifidum. Food Science & Technology, 36 (6), 6-9. Поиск в Google Scholar

16. Шу Г., Ян Х., Цинь Т. и Чен Х. (2013).Влияние аскорбиновой кислоты и гидрохлорида цистеина на рост Bifidobacterium bifidum. Advance Journal of Food Science and Technology, 5 (6), 678-681 Поиск в Google Scholar

17. Сцилард К., Юдит М. Резесси-Сабо, Куанг Д. Нгуен и др. (2008). Изменения микробной популяции и некоторых компонентов в морковном соке во время ферментации с выбранными штаммами Bifidobacterium. Process Biochemistry, 43 (8), 816-821. Поиск в Google Scholar

18. Тао Х., Хан Р., Альварес-Лламас Г. и др.(2007). Дифференциальный анализ экспрессии белков Bifidobacterium, выращенных на разных углеводах. Journal of Microbiological Methods, 69 (2), 364-370. Поиск в Google Scholar

19. Vissers, Y.M., Snel, J., Zuurendonk, P. F., Smit, B.A., Wichers, H.J. (2010). Дифференциальные эффекты штаммов Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus plantarum на индукцию цитокинов в мононуклеарных клетках периферической крови человека. FEMS Immunol Med Microbiol, 59, 60-70. Искать в Google Scholar

20.Юсоф, Р. М., Хаке, Ф., Исмаил, М. (2000). Выделение Bifidobacteria infantis и ее антагонистическая активность против ETEC O157 и Salmonella typhimurium S-285 в продуктах для отъема. Азиатско-Тихоокеанский регион. J. Clin Nutr., 9, 130–135. Искать в Google Scholar

Diamond Корм ​​для собак мелких пород с курицей и рисом

У маленькой собаки нужна еда, которая сохранит ее здоровье? Diamond Small Breed Chicken & Rice — один из многих продуктов Diamond, доступных от Mumme’s, в весах по 6 фунтов.и 18 фунтов. сумки. Ознакомьтесь с информацией ниже, чтобы узнать больше.

Корм ​​для собак Diamond Small Breed с курицей и рисом

Маленький кусочек легко пережевывать маленьким ртом, он также помогает чистить зубы и уменьшать образование зубного налета. 27% белка, 16% жира и добавленные суперпродукты обеспечивают вашу собаку мелких пород питательными веществами, необходимыми для оптимального здоровья и активного образа жизни.

ИНГРЕДИЕНТЫ

Курица, куриная мука, перловая крупа, молотый белый рис, горох, куриный жир (консервированный со смесью токоферолов), сушеный свекольный жом, рыбная мука, яичный продукт, льняное семя, натуральный ароматизатор, хлорид калия, соль, хлорид холина, сушеный цикорий корень, L-карнитин, капуста, семена чиа, тыква, черника, апельсины, киноа, сушеные водоросли, кокос, шпинат, морковь, папайя, экстракт юкки шидигеры, сушеный продукт ферментации Lactobacillus acidophilus, сушеный продукт ферментации Bifidobacterium animalis, сушеный продукт ферментации Lactobacillus продукт, добавка витамина E, бета-каротин, протеинат железа, протеинат цинка, протеинат меди, сульфат железа, сульфат цинка, сульфат меди, йодид калия, мононитрат тиамина (витамин B1), протеинат марганца, оксид марганца, аскорбиновая кислота, добавка витамина A, биотин, ниацин, пантотенат кальция, сульфат марганца, селенит натрия, гидрохлорид пиридоксина (витамин B6), добавка витамина B12, рибофлавин (витамин B2), добавка витамина D мент, фолиевая кислота.
Содержит источник живых естественных микроорганизмов.

ГАРАНТИЙНЫЙ АНАЛИЗ

Сырой белок	27,0% Минимум
Сырой жир	16,0% Минимум
Сырая клетчатка	3,0% Максимум
Влажность	10,0% Максимум
цинк	150 мг / кг Минимум
Селен	0,3 мг / кг Минимум
Витамин E	150 МЕ / кг Минимум
L-карнитин *	30 мг / кг Минимум
Омега-6 жирные кислоты *	2.4% Минимум
Омега-3 жирные кислоты *	0,4% Минимум
Всего микроорганизмов * (Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium animalis, Lactobacillus reuteri)	Не менее 1000000 КОЕ / фунт

* Не признано важным питательным веществом в соответствии с профилями питательных веществ кормов для собак AAFCO.
Калорийность : 3683 ккал / кг (345 ккал / чашка) Расчетная метаболическая энергия

НАПРАВЛЯЮЩАЯ ПОДАЧИ

Масса (фунт.)	Стандартные мерные чашки / день
1–5	¼ — ½
5-10	½ — 1
10–15	1–1
15-20	1–1
20–25	1–1
25–35	1–2
35–45	2¼ — 2⅔

ЗАЯВЛЕНИЕ AAFCO

Формула с курицей и рисом для взрослых собак мелких пород Diamond Naturals разработана для соответствия уровням питания, установленным профилями питательных веществ для собак AAFCO для обслуживания.

.