Резус слабоположительный: честно о том, как быть родителем

Содержание

Слабоположительный резус-фактор (Rh-Du): как такое может быть? | Увлеченные люди

Я пребывала в заблуждении очень долго. С генетикой в институте у меня было очень хорошо, теория наследования казалась простой и понятной. История про наследование групп крови — математическое уравнение, а с резус-фактором вообще все просто.

Цепочка ДНК двойная. Если в гене, кодирующем резус-фактор, совпадает доминантный (активный) и рецессивный (подавляемый) признак, то резус-фактор положительный. Если совпадают два рецессивных фактора — то резус отрицательный.

Доминантный всегда признак присутствия чего-то, а рецессивный — отсутствие. Это как смешать красную краску и воду. Если 2 краски — цвет плотнее, если краска и вода — красный, чуть бледнее, если 2 воды то прозрачный.

И в 34 года я увидела в собственном анализе резус-фактора «слабо положительный Rh Du». Пришлось разбираться.

Историческая справка

Примерно до 2000 года люди со слабоположительным резусом определялись как отрицательные. Они и сейчас определяются как отрицательный реципиент. Картина всегда индивидуальная, но им переливать можно либо собственную, либо отрицательную кровь. А вот как доноры — они положительные. Их кровь нельзя вливать резус-отрицательным.

Наличие или отсутствие резус-конфликта тоже индивидуально. Существующая статистика гласит, что людей со слабоположительным резусом всего 1%. Я почти на 100% уверена, что их гораздо больше, мы — недообследованные. Но до сих пор Rh-Du диковинка для врачей.

Оказалось, что неспециализированная генетика нехило упрощает картину. Я ее тоже упрощу, но чуть меньше.

Гены в нашем ДНК кодируют белки. Реакция на резус фактор определяется наличием или отсутствием нескольких групп белков. Если белки отсутствуют у нас в крови, организм считает их чужими и борется с ними.

В системе резус-фактора есть целых 54 белка (которые мы называем антигенами), из которых наиболее важны 6: D, C, c, Cw, E, e. Самым активным в отношении резус-конфликта является D.
То есть, если у вас нет одного или нескольких из этой группы белков, то ваш резус фактор может определяться как слабоположительный.

По сути, это небольшая мутация, которых у нас в ДНК немало. Если ген с мутацией работает в паре со здоровым геном, здоровый ген его перекрывает (а-ля цвет раствора все равно красный).
А вот если мутировавший ген работает в паре с рецессивным, то именно он определяет белок, который кодируется. Ведь рецессивный не кодирует эти белки вообще.

Вдобавок, существуют ситуации, когда по различным причинам доминантный ген не отрабатывает. И тогда по ДНК у человека должен быть положительный резус, а в реальности он отрицательный или слабоположительный.

И со знанием этого, та теория, которую нам давали в ВУЗах и школе, трещит по швам.

Например, с очень и очень небольшой вероятностью, но может быть резус-положительный ребенок у 2-х резус отрицательных родителей. Это если у родителей на самом деле слабоположительный резус. И два комплекта генов по сумме набрали одну нормальную доминантную комбинацию. Такой биологический тетрис.

Напоследок практический совет: если у вас слабоположительный резус-фактор, не поленитесь и сделайте его расшифровку на станции переливания крови. В результате вам дадут бумажечку, где написано, что «переливать резус-отрицательную», или разрешат переливать положительную. Эту бумажечку вы можете откопировать и предъявлять по необходимости. Врачи и ситуации разные, а резус-отрицательную без повода не вливают, слишком редкая.

И еще. Как вести беременность, если вы Rh-Du, точно не знает никто. Я перерыла весь интернет и говорила с несколькими врачами. Одни врачи рекомендуют вести беременность, как резус-отрицательную, другие говорят, что небольшого количества вашего антигена хватит.
Учитывая то, что Rh-Du бывает разного фенотипа, эта неоднозначность понятна. Но. . анализ на антитела лишним не бывает.

Таня

Об авторах

#tanya-bodyandmind

Слабоположительный резус — 9 ответов

Столько лет живу, а вот к 30-ти годам столкнулась, что у меня

слабоположительный резус фактора. В первую беременность мне никак не могли определить группу крови и резус — то II, то III, то с плюсом, то с минусом. Уже всю искололи, с пятой попытки по совпадению большинства результатов выяснилось, что у меня III+. А сейчас по анализ  на группу пришел (на этот раз дважды) с результатом —слабоположительный резус и с комментарием —требуется индивидуальный подбор донора. Промыкавшись с таким анализом по разным лабораториям и станциям переливания крови, выяснила все то, что написано в статье ниже:

Около 1% Rh+ европейцев имеют особый вид резус-фактора – слабоположительный (weakly Rh+). Такие люди могут столкнуться с ситуацией, когда их резус определяется то как положительный, то как отрицательный. Отсюда легенды про то, что резус может меняться на протяжении жизни. Меняться он, безусловно, не может. Опять же все дело в чувствительности метода тестирования. До середины 1990-х слабоположительный принимали за негативный резус. И до сих пор такая путаница может быть, если для определения резуса используют устаревшие методики.

Однако различать разные виды резуса очень важно. Уже накоплено достаточно практических данных про особенность weakly Rh+ и есть конкретные рекомендации для таких людей:

  • При беременности женщин со слабоположительным резусом следует рассматривать как Rh+. Хоть антигена и мало на эритроцитах, но и клеток плода проникает в кровь матери мало. Такого количества Rhдостаточно, чтобы препятствовать конфликту.
  • При переливании крови реципиенты weakly Rh+ расцениваются как резус-отрицательные и им должна переливаться только (!) резус-отрицательная кровь. Хотя на самом деле кровь у таких людей резус-положительная, но наличие слабого антигена может привести к тяжелым осложнениям при переливании Rh+крови.
  • Если же человек с weakly Rh+ резусом сам становиться донором, его кровь должна быть расценена как резус положительная и переливаться только Rhреципиентам.

Неинвазивное определение резус-фактора плода по крови матери

Для неинвазивного определения резус-фактора плода используется периферическая венозная кровь беременной женщины, из которой выделяется циркулирующая в ней плодная ДНК, которая анализируется на наличие последовательности ДНК экзонов 7 и 10 гена RHD, кодирующего выработку антигена D. Исследование проводится методом ПЦР в режиме реального времени.

Как известно, концентрация ДНК плода в кровотоке беременной становится достаточной для проведения анализа, начиная с 10 недель беременности (по УЗИ). Важно отметить, что данный способ исследования ДНК плода является неинвазивным, не несет угрозы течению беременности, т.е. абсолютно безопасен как для женщины, так и для плода. Точность используемой методики составляет 96-100% и зависит от количества плодной ДНК в кровотоке беременной.

С биологической точки зрения именно RHD определяет резус-принадлежность крови человека. Обычно для резус-отрицательных людей характерно полное отсутствие гена

RHD. В таких случаях результаты генотипирования совпадают с результатами обычного серологического способа определения резус-фактора крови. Однако примерно у 1% людей с серологически резус-отрицательной кровью ген RHD может присутствовать, что, как правило, связано с наличием мутации в RHD, и приводит к отсутствию или неполной экспрессии (работы) гена. В таких случаях результаты генотипирования показывают резус-положительный вариант крови, а серологически выявляется отрицательный либо слабоположительный резус-фактор. Для таких пациенток определить резус-фактор плода невозможно. Однако наблюдение за течением беременности нужно проводить по схеме ведения резус-отрицательных женщин с учетом возможности развития резус-конфликта. В любом случае после родов рекомендуется уточнить резус-фактор ребёнка серологическим методом.

В случае выявления последовательности ДНК гена RHD в крови беременной женщины с резус-отрицательной группой крови делается вывод о положительном резус-факторе плода. В таких ситуациях вероятность развития резус-конфликта и гемолитической болезни реально существует, поэтому женщине и врачам необходимо принимать все меры предосторожности в отношении развития данного грозного осложнения беременности. В целом, положительный результат теста говорит о необходимости строгого динамического контроля за уровнем соответствующих антител в крови беременной и своевременного введения антирезусного иммуноглобулина для предотвращения развития гемолитической болезни плода/новорожденного. Однако вопрос о введении препарата должен решаться только акушером-гинекологом на основании, в том числе, и других методов обследования беременной. При отсутствии антител к Rh-фактору по результатам серологического метода (ИФА) и генетически положительном резус-факторе плода, женщине рекомендуется введедние антирезусного иммуноглобулина на сроке от 28 недель беременности (для профилактики гемолитической болени новорожденного) и не позднее 72 часов после родоразрешения (для профилактики резус-конфликта при следующей беременности).

В случае отсутствия ДНК гена RHD в крови беременной делается вывод о высокой вероятности резус-отрицательной крови плода (однако для подтверждения результата рекомендуется повторить тест на более поздних сроках, но не позднее 27 недель беременности). В такой ситуации вероятность развития резус-конфликта между материнским организмом и плодом практически отсутствует, что говорит об отсутствии необходимости постоянного определения титра анти-D-антител и введения антирезусного иммуноглобулина беременной. А также в случае необходимости проведения инвазивной диагностики плода не увеличивает риски развития гемолитической болезни.

Стоит отметить, что данный анализ актуален только для тех супружеских пар, в которых реально существует угроза развития резус-конфликта при беременности, т.е. женщина обладает резус-отрицательной кровью, а мужчина – резус-положительной. При этом мужчина должен быть гетерозиготен по наличию делеции гена RHD. Только в этом случае у супружеской пары возникает 50%-ная вероятность закладки эмбриона с резус-отрицательной группой крови. Генотип мужчины можно определить, предварительно проведя ему генетический анализ определения генотипа по гену RhD (тест №2008.4).

Антитела к резус-фактору

Резус-фактор – одна их характеристик крови. Он бывает отрицательным или положительным, что никак не влияет на состояние здоровья человека в повседневной жизни, но может серьезно препятствовать нормальному протеканию беременности у женщин вследствие резус-конфликта. Это происходит, если резус-отрицательная мать вынашивает ребенка с резус-положительной кровью. 

Чтобы предотвратить резус-конфликт, используются сыворотки, связывающие антитела в крови матери. Для ранней диагностики патологии используется анализ крови матери на наличие антител к резус-фактору.

Сдать анализ на антитела к резус-фактору вы можете в процедурном кабинете нашей клиники. Как только результат будет готов, вы получите его по электронной почте.

Как происходит резус конфликт

В крови человека есть клетки, которые переносят кислород – эритроциты. На их поверхности у большинства людей находится белок – гликопротеин, который и называют резус-фактором (Rh). Если белок присутствует, то группа крови человека считается резус-положительной (Rh+), если белок отсутствует – резус-отрицательной (Rh-).

Учитывать резус-фактор необходимо только в случае переливания крови или у беременных женщин с отрицательным резус-фактором для избегания резус-конфликта.

Справка! Резус-конфликт – это реакция иммунной системы человека с отрицательным резус-фактором на контакт с кровью с положительным резус-фактором. Иммунная система человека начинает выработку специфических защитных белков (антител), которые впоследствии атакуют и разрушают чужеродные эритроциты.

При первой беременности вероятность резус-конфликта мала, так как не было контакта крови ребенка и иммунной системы матери.

При нарушении плацентарного барьера, резус-положительные эритроциты ребенка попадают в организм роженицы. У женщины начинается выработка антител, которые с большой вероятностью “сработают” при следующей беременности.

Проникая в плаценту, антитела к резус фактору атакуют и разрушают эритроциты ребенка. Это может угрожать здоровью плода или даже привести к невынашиванию беременности. Риск резус-конфликта возникает с каждой последующей беременностью. Также значительно повышают риск резус-конфликта предшествующие выкидыши и аборты.

Показания к исследованию

Если мать имеет отрицательный резус-фактор, а отец положительный, очень высока вероятность, что ребенок также имеет положительный резус-фактор. Поэтому и назначается анализ на выявление антител.

Если оба родителя имеют одинаковый резус-фактор, анализ не назначается.

Как подготовиться к сдаче крови на анализ

Для анализа используется венозная кровь. Особо строгих правил для подготовки к забору крови не существует. Важное требование, чтобы от последнего приёма пищи прошло не менее 4х часов, так что рекомендуется сдавать кровь утром натощак.

Расшифровка результатов

В идеале антител в крови матери быть не должно. Только это является показателем отсутствия резус-конфликта матери и плода, и гарантирует полную его безопасность.

Если антитела присутствуют

Если антитела присутствуют, значит имеется резус-конфликт, и необходимо принимать меры.

Анализ является не только качественным (выявлением) но и полуколичественным – измеряется степень проявленности резус-конфликта.

Если результат очень слабоположительный (+) или слабоположительный (++) требуется внимательное наблюдение динамики развития резус-конфликта. В случае положительной (+++) или сильноположительной (++++) реакции требуется срочная госпитализация для того, чтобы снизить реакцию и обеспечить возможность нормального протекания беременности.

Процедура анализа несложна, результат обычно готов в течение одного календарного дня.

Тест на антитела к коронавирусу в Минске

Анализ крови на антитела к возбудителю COVID-19 выполняется для определения наличия иммунитета, подтверждения текущей или перенесенной коронавирусной инфекции.

Инфекционный процесс в организме сопровождается выработкой антител двух типов: IgM и IgG. Как правило, при заболевании коронавирусной инфекцией Сovid-19 вырабатываются антитела как к нуклеокапсидному (N), так и к спайковому (S) белку вируса.

Иммуноглобулины класса M (IgM) — ранние антитела, появляются в крови первыми, но не раньше 7-14 дней после контакта с возбудителем, затем их уровень постепенно снижается. Наличие антител класса М указывает на ранний этап инфекции.

Иммуноглобулины класса G (IgG) начинают появляться в крови примерно через 3-4 недели после инфицирования и могут сохраняться длительное время. Наличие IgG указывает на ранее перенесенную инфекцию, а также говорит о наличии специфического иммунитета к вирусной инфекции.

По соотношению титров этих антител можно понять, на какой стадии заболевания находится человек.

После перенесенной инфекции Сovid-19 образуются антитела к нуклеокапсидному белку (N). В то время как антитела к S-белку образуются как после перенесенного заболевания, так и после вакцинации.

Для оценки поствакцинального иммунитета используется определение IgG к S-белку.

Количественное определение IgG к S-белку вируса SARS-CoV-2 позволяет отслеживать динамику уровня антител, в том числе после вакцинации, и оценить, насколько меняется со временем устойчивость иммунного ответа к COVID-19.

Наши услугиГотовность
(раб. дн.)
ИФА. SARS-CoV-2, антитела IgG к N-белку (нуклеокапсидному) (полуколич. опред.)3
ИФА. SARS-CoV-2, антитела IgM к N-белку (нуклеокапсидному) (полуколич. опред.)3
ИФА. SARS-CoV-2, антитела IgG к S-белку, поствакц. иммунитет (полуколич. опред.)3
ИФА. SARS-CoV-2, антитела IgG к S-белку (количественное опред.)3
Материал для исследования: венозная кровь

Отдельно оплачиваются услуги регистрации и взятия биоматериала.

Подготовка к анализам

Специальной подготовки не требуется. Анализы сдаются натощак либо не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи, можно пить воду.

Оформление тестов на IgM осуществляется только при наличии паспорта (допускается ксерокопия паспорта)! При оформлении необходимо заполнить анкету.

При обнаружении антител класса М (положительный результат теста) информация о пациенте и его результате будет предоставлена в государственное учреждение здравоохранения по месту жительства (регистрации) пациента в соответствии с законодательством (приказы Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 21.05.2020 №557 и от 01.07.2020 №690) для медицинского наблюдения за пациентом и членами его семьи.

Иммуноро Кедрион инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Immunoro Kedrion Лиофилизат для приготовления раствора для в/м введения (25251)

Раствор препарата вводят в/м.

Послеродовая профилактика.

1000-1500 МЕ (200-300 мкг) рекомендуют в качестве оптимальной стандартной дозы без предварительного тестирования на инфильтрацию в кровоток матери фетального гемоглобина (HbF) по методу Кляйхауэра-Бетке. Препарат вводят матери как можно раньше после родов, но не позднее 72 ч.

Предродовая и послеродовая профилактика. Первая доза 1000-1500 МЕ (200-300 мкг) на 28-й неделе беременности. Следующую дозу 1000-1500 МЕ (200 — 300 мкг) вводят в течение 72 ч после родов, если ребенок родился резус-положительным.

После прерывания беременности, внематочной беременности или пузырного заноса. В течение первых 72 ч после вмешательства препарат вводят в дозе 600-750 МЕ (120-150 мкг) до 12-й недели беременности; 1250-1500 МЕ (250-300 мкг) после 12-ти недель беременности; 1250-1500 МЕ (250-300 мкг) после амниоцентеза или биопсии хориона.

После несовместимого переливания резус-положительной крови. 500 МЕ-1250 МЕ (100-250 мкг) на каждые 10 мл перелитой крови в течение нескольких дней.

В случае патологии свертывающей системы, когда в/м введение препаратов противопоказано, иммуноглобулин человека антирезус Rh0(D) может быть введен п/к. После инъекции на место введения осторожно накладывают компресс.

Если требуется большая общая доза (более 5 мл), рекомендуется разделить ее на меньшие дозы и сделать инъекции в разные места.

Приготовление и введение раствора препарата

Следует согреть флакон с лиофилизатом препарата и ампулу с растворителем до комнатной температуры или температуры тела. Набрать содержимое ампулы с растворителем в инъекционный шприц, удалить защитный колпачок с резиновой пробки флакона с лиофилизатом и медленно ввести растворитель во флакон; осторожно встряхнуть флакон с раствором или выдержать до полного растворения лиофилизата; набрать раствор в шприц; сменить иглу и произвести инъекцию.

Неполное растворение лиофилизата приводит к потере активности препарата. Не следует использовать, если раствор мутный или содержит осадок. Лиофилизат из вскрытого флакона должен быть восстановлен и использован немедленно. Остатки препарата нужно уничтожить.

Введение антирезус-иммуноглобулина при слабоположительном резусе беременной — Вопрос иммунологу

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 74 направлениям: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гинеколога-эндокринолога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского онколога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, липидолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, подолога, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 96.28% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

Трудности в иммуногематологии: слабый антиген D

Med J Вооруженные силы Индии. 2005 г., октябрь; 61(4): 348–350.

H KUMAR

H KUMAR

*

* Доцент, кафедра переливной медицины, AFMC, Pune

DK Mishra

+ Классифицированный специалист (патология и гематология), AHDC (R & R), Delhi Cantt

RS Sarkar

# Cl Spl (Path & Haem) MH Roorkee

M Jaiprakash

** Профессор и заведующий кафедрой трансфузионной медицины, AFMC, Пуна

* Доцент, кафедра трансфузионной медицины, Пуна

+ Классифицированный специалист (патология и гематология), AHDC(R&R), Delhi Cantt

# Cl Spl (Path & Haem) MH Roorkee

** Профессор и заведующий отделением трансфузионной медицины AFMC , Pune

Получено 12 декабря 2003 г . ; Принято 30 ноября 2004 г.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Background

Система крови Rh является одной из наиболее полиморфных и иммуногенных систем, известных человеку. Экспрессия антигена группы крови Rh является сложной. Антиген Rh D является наиболее важным из антигенов, составляющих систему антигена Rh. В большинстве случаев антиген D можно легко обнаружить. Однако из-за вариабельности экспрессии встречаются слабые формы антигена. Реактивность слабого D с антисывороткой вариабельна и представляет собой проблему при хранении крови.

Методы

Проведен ретроспективный анализ за пятилетний период. Образцы крови, которые были отрицательными на Rh D методом немедленной спин-пробирки, были проверены на слабый антиген D с помощью дополнительных лабораторных анализов.

Результат

Из 34932 серийных тестов на группировку резус-фактора, проведенных в нашем банке крови, частота выявления слабого D-резус-антигена составила 0,189%. Все это было подтверждено антиглобулиновым тестом.

Заключение

Эти пациенты представляют собой проблему для банка крови и любопытство для клинициста.Хотя это редкость, все медицинские работники должны знать об этом объекте, чтобы избежать аллоиммунизации против D.

Ключевые слова: Слабый D, резус-группа крови

Введение

Открытие резус-антигена началось с обнаружения антител к резус-антигену Левином и Стетсоном в 1939 году. Это было вторым крупным открытием в иммуногематологии после открытия группы крови АВО Кари Ландштейнер в 1900 году. Человеческая раса была разделена на тех, кто обладал резус-антигеном (резус-положительный) и тех, у кого его не было (резус-отрицательный).Впоследствии Фишер и Рейс опубликовали свою работу по резус-антигенам, в которой была предложена и принята номенклатура CDE системы групп крови Rh. Основным антигеном в группе крови Rh является антиген «D», экспрессируемый белком Rh D. В зависимости от этнической группы от 3% до 25% населения не имеет антигена RhD. Поскольку иммунизация анти-D может происходить у D-отрицательных реципиентов, антиген D имеет решающее значение для переливания крови. Примерно в то же время был обнаружен и описан слабый антиген D.Тогда его назвали антигеном D. Отличие D-антигена от D-антигена состоит в том, что последний слабо иммуногенен и его трудно обнаружить. От 0,2% до 1% белых людей являются носителями слабого D-антигена [1].

Материалы и методы

Резус-группа крови всех доноров и пациентов в нашем банке крови была проанализирована за пятилетний период с 01 января 1998 г. по 31 декабря 2002 г. Всего было обследовано 34942 субъекта. Рутинное типирование резус-фактора проводилось с использованием метода немедленной спиновой трубки.Образцы крови, которые были отрицательными для агглютинации методом немедленной спин-пробирки, были дополнительно исследованы. Образцы, демонстрирующие агглютинацию после инкубации или после добавления сыворотки AHG, считались слабой D. Использовались соответствующие контроли. Равные объемы анти-D сыворотки и 2-5% суспензии отмытых эритроцитов помещали в чистую стеклянную пробирку. Их перемешивали и инкубировали при 37°С на водяной бане в течение 45-60 минут (по рекомендации производителя). Альтернативно, в экстренной ситуации мы инкубировали в течение 10 минут, а затем центрифугировали при 1000 об/мин в течение одной минуты, чтобы получить быстрый результат.Однако для подтверждения всегда выполнялась стандартная методика AHG. Пробирку осторожно ресуспендировали и наблюдали агглютинацию клеток. Если тестовые эритроциты были агглютинированы (но не в пробирке с отрицательным контролем), тест регистрировался как положительный, и необходимо было перейти к антиглобулиновой фазе теста. Если тест-клетки не агглютинировали или результаты были сомнительными, клетки промывали 3-4 раза большими объемами физиологического раствора. После последней промывки физиологический раствор декантировали и добавляли одну-две капли антиглобулиновой сыворотки в соответствии с инструкциями производителя. После этого содержимое пробирки перемешивали и пробирку центрифугировали при 1000 об/мин в течение 30 секунд. Затем клеточную кнопку осторожно ресуспендировали и исследовали на агглютинацию. Все отрицательные результаты были подтверждены под микроскопом.

Результаты

Результаты показаны в . Все образцы, которые были отрицательными по резус-антигену методом немедленной центрифужной пробирки, подвергались дальнейшим испытаниям. Использовались соответствующие средства контроля. Всего из 34932 образцов крови мы обнаружили 32731(93.7%), чтобы быть резус-положительным. Из них 2201 (6,3%) были резус-отрицательными даже после антиглобулиновой фазы тестирования. Было 6 (0,189%) с антигеном D. Все случаи антигена D представлены как отрицательные по резус-фактору D при немедленном методе центрифугирования.

Таблица 1

Общие образцы RH D DU RH DU RH DU RH DU N % N % N % 0 34932 32731 93. 7 2201 6,3 66 0,189

Обсуждение

Слабый D представляет собой количественное различие в результирующем фенотипе антигена с ослабленным фрагментом Rh. Stratton впервые описал слабый антиген D или D в 1946 году. В отличие от европеоидной популяции, где частота положительности RhD-антигена составляет 85%, частота положительности RhD-антигена в Индии составляет около 95% [2, 3]. Частота слабого D равна 0.23% и колеблется от 0,2% до 1% в общей популяции [1]. Проблемы, возникающие из-за слабого антигена D, связаны с его низкой иммуногенностью, что приводит к противоречивым лабораторным отчетам относительно того, является ли человек резус-положительным или отрицательным.

Раньше в банках крови использовались поликлональные антисыворотки, и они содержали низкие титры по сравнению с моноклональными антителами. На отчетность по группе крови влиял титр анти-D-антител в тестовом реагенте. Человек со слабым антигеном D был отмечен резус-положительным в одной лаборатории и резус-отрицательным в другой.Такие противоречивые сообщения приводят к непреднамеренному переливанию резус-положительной крови реципиентам с отрицательным резус-фактором. Высокоэффективные моноклональные реагенты выявляют резус-положительные клетки, которые трудно обнаружить с помощью менее чувствительных поликлональных реагентов [4]. Использование современной чувствительной гелевой системы для типирования по системе АВО и Rh-D дало согласующийся результат по сравнению с традиционной системой определения групп крови [5].

Антиген «D» обладает высокой иммуногенностью, и если резус-положительную кровь перелить резус-отрицательному реципиенту, у реципиента, вероятно, выработаются анти-D-аллоантитела, и после этого ему нельзя будет переливать резус-положительную кровь.Кроме того, если сенсибилизированные резус-отрицательные женщины зачали резус-положительный плод, попадание анти-D-антител через плаценту к нерожденному ребенку приводило к гемолитической болезни новорожденного. Клиническое значение слабого D заключается в том, что переливание таких эритроцитов субъекту, иммунизированному Rh D, может привести к гемолитической трансфузионной реакции. Если эритроциты Weak-D переливают резус-отрицательному субъекту, это может привести к аллоиммунизации антигеном Rh D. Последующее переливание крови от этих доноров сенсибилизированному человеку может привести к ускоренному разрушению донорских эритроцитов.Однако это утверждение обсуждается, поскольку в литературе описано недостаточно случаев, чтобы дать убедительные доказательства. Есть только два сообщения об образовании антител против RhD у резус-отрицательных субъектов после воздействия D-положительных эритроцитов. Напротив, при последующем наблюдении за 45 резус-отрицательными субъектами, которым были перелиты слабые резус-положительные эритроциты, ни у одного из них не развились анти-D. У 34 из этих субъектов резус-положительные эритроциты можно было обнаружить в течение 100 дней после переливание. Поэтому переливание резус-отрицательной крови лицам со слабой группой крови D некоторые рабочие считали расточительным. Текущее мнение большинства, хотя и спорное, заключается в том, что субъекты со слабым D, особенно если они являются женщинами в возрастной группе детородного возраста, должны рассматриваться как резус-положительные, когда они являются донорами, и как D-отрицательные, когда они являются реципиентами переливания крови.

Два гена, RHD и RHCE, кодируют антигены резус-группы крови. Обычно считается, что слабый фенотип D может возникать из-за трех различных генетических механизмов.

  • 1

    Человек может унаследовать ген RHD, кодирующий слабую экспрессию.

  • 2

    Ген «D» может взаимодействовать с геном «C» соответствующей хромосомы в генотипе Cde/Cde или cDe/Cde, и по неизвестным причинам экспрессия антигена D подавлена.

  • 3

    Ген RHD может не кодировать все эпитопы, составляющие полный антиген D [6].

Следует отметить, что, хотя они присутствуют в уменьшенных количествах, все эпитопы ‘D’ присутствуют в механизме 1 и 2. В этих ситуациях экспрессируется слабый антиген D, и такие люди не обладают способностью продуцировать алло анти-D-антитело.Те случаи, которые проявляются из-за механизма 3, не имеют всех эпитопов и, следовательно, обладают способностью продуцировать алло-анти-D к отсутствующим эпитопам антигена D. Эти случаи представляют собой частичный D-антиген. В последние годы, используя современные методы, такие как молекулярные исследования, рабочие проанализировали различные образцы геномной ДНК, полученные от людей, экспрессирующих D-положительный, D-отрицательный, слабый D-фенотип и частичный D-фенотип. Было замечено, что некоторые серологически резус-отрицательные индивидуумы обладали интактным геном RHD, но имели точечную мутацию, приводящую к выражению резус-отрицательного фенотипа [7].У лиц со слабым фенотипом D могут обнаруживаться аминокислотные замены во внутриклеточном и трансмембранном белковом сегменте резус-антигена [8]. Анализ тайваньской популяции с использованием полимеразной цепной реакции – полимеризации длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) и прямого секвенирования выявил четыре типа мутаций, которые объясняют слабый D-антиген [9]. Некоторые исследователи наблюдали, что большинство людей со слабым D несут измененные антигены из-за аллелей RHD, кодирующих аберрантный белок RhD [10], в то время как другие наблюдали, что гены, кодирующие слабый фенотип D, демонстрируют нормальную последовательность гена RHD, но сильно сниженную экспрессию матричной РНК RHD [11]. ].В последнее время успешно используется УФ-спектрофотометрический подход к типированию слабого D [12].

Частота слабой Д варьирует во всем мире и колеблется от 0,2% до 1% у белых [1]. В нашем исследовании частота слабой Д составила 0,189%. Bhatia и соавт. оценили частоту слабого D в Индии в 0,3-0,5% [2]. Недавнее исследование в Индии показало, что заболеваемость составляет 0,15. [13]. Возможно, что использование сильнодействующих моноклональных анти-D-реагентов может объяснить несколько более высокую частоту слабого D в нашем исследовании.

Таким образом, слабый антиген D Rh представляет собой особую клиническую ситуацию. Субъект может столкнуться с проблемами при типировании резус-группы крови и предотвратить потенциальный риск образования аллоантител при переливании резус-положительной крови. Аллоиммунизация женщин со слабой Д-Д в детородном возрасте губительна и приводит к гемолитической болезни новорожденных. Было бы разумно рассматривать лиц со слабым антигеном D как резус-положительных при представлении в качестве донора и резус-отрицательных при столкновении с реципиентом.

Список литературы

1. Урбуняк С.Дж., Робертсон А.Е. Успешная программа иммунизации резус-отрицательных мужчин-добровольцев для производства анти-D с использованием замороженной/размороженной крови. Переливание. 1981; 21: 64–69. [PubMed] [Google Scholar]

2. Бхатия Х.М. Процедуры в банке крови и иммуногематологии, 1977: стр. 44.

3. Contreras M, Knight RC. Донор резус-отрицательный. клин. лаборатория гемат. 1989; 11: 317–322. [PubMed] [Google Scholar]4. Уильямс М. Моноклональные реагенты для типирования резус-D ирландских пациентов и доноров: обзор.Бр J биомедицинских наук. 2000; 57: 142–149. [PubMed] [Google Scholar]5. Лэнгстон М.М., Проктор Дж.Л., Чиполоне К.М., Стрончек Д.Ф. Оценка системы Gel для группировки и типирования по системе АВО. Переливание. 1999;39(3):300–305. [PubMed] [Google Scholar]6. Типпет П. Подразделения резус-антигена D, обзор. Медицинская лаборатория наук. 1988; 45:88–91. [PubMed] [Google Scholar]7. Авент Н.Д., Мастрин П.Г., Армстронг-Фишер С.С., Лю В., Финнинг К.М., Мэддокс Д., Урбаниак С.Дж. Доказательства генетического разнообразия, лежащего в основе RhE-, отрицательного Weak D (D) и частичного фенотипа D, как определено с помощью анализа мультиплексной полимеразной цепной реакции гена RHD.Кровь. 1997; 89: 2568–2577. [PubMed] [Google Scholar]8. Вагнер Ф.Ф., Гасснер С., Мюллер Т.Х., Шоррицер Д., Шунтер Ф., Флегель В.А. Молекулярная основа слабых D-фенотипов. Кровь. 1999; 93: 385–393. [PubMed] [Google Scholar]9. Линь И.Л., Ши М.С., Хайе М.Х., Лю Т.К., Чанг С.Э., Линь С.Л., Чанг Д.Г. Молекулярная основа слабого D в тайваньском языке. Энн Хематол. 2003;82(10):617–620. [PubMed] [Google Scholar] 10. Вагнер Ф.Ф., Фромайер А., Ладевиг Б., Эйхер Н.И., Лонисер К.Б., Мюллер Т.Х., Зигель М.Х., Флегель В.А. Слабые аллели D выражают разные фенотипы.Кровь. 2000;95:2699–2708. [PubMed] [Google Scholar] 11. Авент НД, Рид МЭ. Система резус-группы крови — обзор. Кровь. 2000;95:375–387. [PubMed] [Google Scholar] 12. Нараян С., Галлоуэй Л., Нонояма Г.Ф., Лепарк, Гарсия-Рубио Л.Х., Поттер Р.Л. УФ-видимый спектрофотометрический подход к фенотипированию II группы крови подтипа A2 и слабого D и анализу цельной крови. Переливание. 2002;42(5):619–626. [PubMed] [Google Scholar] 13. Шрикришна А., Ситралакчми С., Шакумтала Деви, Дамодар П., Джаянти М., Патил Р. Загадка Рена — возникшие проблемы.Индийский J Haemat и Blood Trans. 2001; 19: 102–103. [Google Scholar]

Тестирование на слабый D-антиген: спектр и его практическая роль в переливании крови резус-отрицательным на Андаманских и Никобарских островах

Abstract

Цели:

Резус-группа крови с вариабельной экспрессией D-антигена является одной из сложные системы в иммуногематологии. Слабый антиген D представляет собой фенотип, при котором антиген D слабо экспрессируется на эритроцитах, и этот антиген не может быть обнаружен обычными методами.Это исследование было проведено для определения частоты резус-отрицательности и слабого антигена D среди здоровых доноров крови, а также для рассмотрения клинической значимости слабого антигена D, относящегося к переливаниям резус-D-отрицательным.

Материалы и методы:

Это поперечное проспективное исследование проводилось в больнице G. B Pant с января 2016 г. по июнь 2017 г., в ходе которого все доноры крови из Порт-Блэра и прилегающих Андаманских и Никобарских островов были сгруппированы по антигену Rh D. и тех, у кого был отрицательный результат на D-антиген, дополнительно тестировали на слабый D-антиген путем инкубации в течение 30 минут и последующего добавления сыворотки против человеческого глобулина.

Результаты:

Из 6415 доноров 6085 (94,86%) были резус-положительными и 330 (05,14%) резус-отрицательными. Среди резус-D-отрицательных доноров 05 (01,51%) были положительными на слабый D-антиген. Частота резус-отрицательности D составила 25,76 % в группе крови, 25,15 % в B, 07,88 % в AB и 41,21 % в фенотипе группы крови O.

Заключение:

Хотя частота слабого D-антигена низкая (01,51%), сильная иммуногенность Rh-D-антигена указывает на необходимость соответствующего тестирования на слабый D-антиген.Это вызывает особую озабоченность у Rh D-отрицательных беременных женщин, поскольку это может привести к аллоиммунизации, если случайно получить слабую кровь с положительным антигеном D.

Ключевые слова: Alloimmunization , RHESUS D отрицательный , Transfusion , Слабый D антиген

Введение

RHESUS (RH) Antigen крови были впервые описаны Левином и Стесмосом в 1939 году, которые описали пациента, имеющему антитело, вызывающее агглютинацию эритроцитов (эритроцитов) у 85% АВО-совместимых доноров.Это было вторым крупным открытием в иммуногематологии после открытия Ландштейнером в 1990 году групп крови системы АВО. Группы крови человека были разделены на две основные группы в зависимости от наличия (резус-положительный) или отсутствия (резус-отрицательный) резус-антигена. Позже Фишер и Рейс опубликовали свою работу по резус-антигену, в результате чего была принята номенклатура CDE. Система Rh состоит из более чем 50 антигенов, причем D является основным антигеном, экспрессируемым белком RhD. Вне системы Rh 5 (D, C, c, E и e) важны для возникновения клинических осложнений.Молекулярная генетика показала, что существует два гена Rh, один из которых кодирует D, а другой кодирует антигены Cc и Ee [1]. После конфликтной группировки сложной системы Rh слабый антиген D был описан Stratton в 1946 году. метод трубки). Однако демонстрация этого слабо экспрессируемого антигена может быть предпринята путем длительной инкубации и использования античеловеческого глобулина.

Спустя годы после открытия этого слабого антигена D до сих пор ведутся споры о том, проводить ли рутинное тестирование на слабый антиген D или нет. Клинические последствия вызывают беспокойство при работе с беременными женщинами.

Данное исследование было проведено с целью определения частоты слабого фенотипа D среди резус-D-отрицательных лиц. Цель состоит в том, чтобы подчеркнуть его клинические последствия, связанные с риском аллоиммунизации у резус-отрицательных лиц, и обоснование его тестирования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Это кросс-секционное проспективное исследование было проведено в Банке крови, больнице G.B. Pant, Институте медицинских наук Андаманских и Никобарских островов, Порт-Блэр с января 2016 г. по июнь 2017 г., в котором участвовали все доноры из Порт-Блэр и соседних Андаманские и Никобарские острова были сгруппированы на наличие антигена RhD методом немедленной центрифужной трубки, а те, у кого был отрицательный результат на антиген D, были дополнительно проверены на слабый антиген D, убедившись, что каждый донор исследуется только один раз.Слабоположительные по антигену D клетки имеют слабую экспрессию антигена D и могут быть ошибочно классифицированы как D-отрицательные клетки в обычных процедурах группировки резус-фактора. Однако более сложный непрямой антиглобулиновый тест способен обнаруживать все уровни слабого D-антигена, за исключением типов очень низкого уровня.

Тестирование на слабый D-антиген

Принцип – Процедура основана на принципе агглютинации эритроцитов, несущих антиген RhD, в присутствии анти-RhD антител. Фенотипирование (группирование) проводили путем тестирования образца крови на моноклональный IgM анти-D (MEDICLONE; M/s Mediclone Biotech Pvt.Ltd., Тамил Наду, Индия) в соответствии с инструкциями производителя. Наличие гемагглютинации определяло положительный резус-антиген, и кровь классифицировали как резус-положительную. Если агглютинации не было, то эритроциты проверяли с помощью MEDICLONE D IgG (Mediclone Biotech Pvt. Ltd., Тамил Наду, Индия), поскольку он сенсибилизирует Rh-положительные или слабые D-антигенные клетки, которые давали агглютинацию при добавлении реактива Кумбса (непрямой тест Кумбса).

Проба

Антикоагулированная кровь резус-отрицательных доноров служила пробой для определения слабого D.Суспензию эритроцитов в 5% солевом растворе готовили путем промывания эритроцитов изотоническим солевым раствором.

Процедура

Для каждого образца брали пробирку и маркировали как образец для испытаний. Пробирка с физиологическим раствором служила контролем. В тестовую и контрольную пробирки добавляли по одной капле MEDICLONE D (IgG) и физиологического раствора соответственно. В каждую пробирку добавляли по одной капле 5% взвеси эритроцитов. После перемешивания проводили инкубацию в течение 30 мин для сенсибилизации. После 3–4-кратного промывания сенсибилизированных клеток физиологическим раствором и удаления супернатанта добавляли 2 капли античеловеческой сыворотки (сыворотки Кумбса) и центрифугировали в течение 1 мин.Клетки осадка осторожно удаляли и исследовали макроскопически, а также микроскопически на предмет агглютинации.

Интерпретация

Агглютинация сенсибилизированных эритроцитов сывороткой Кумбса расценивалась как слабый положительный антиген D (Du), тогда как резус-отрицательная кровь не приводила к агглютинации эритроцитов.

Отрицательные контроли с использованием известных D-отрицательных эритроцитов проводили параллельно; эти пробирки должны быть свободны от агглютинации; в противном случае все процедуры испытаний и контроля должны быть повторены.Для подтверждения достоверности всех отрицательных тестов использовали сенсибилизированные эритроциты; после добавления сенсибилизированных эритроцитов и центрифугирования должна быть видна агглютинация; в противном случае результат теста недействителен, и процедуры необходимо повторить. Поскольку этот тест является очень чувствительным тестом, в случае возникновения каких-либо сомнений в интерпретации весь тест следует повторить после тщательного промывания эритроцитов в физиологическом растворе и ресуспендирования их перед использованием. Если тест на сенсибилизированные клетки отрицательный или тест на несенсибилизированные клетки положительный, то тест на слабый D-антиген недействителен, и его следует повторить.

Соответствие этическим стандартам

Исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией и одобрено Локальным этическим комитетом Института. Информированное письменное согласие было получено от всех пациентов до их включения в данное исследование.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего за период с января 2016 г. по июнь 2017 г. поступило 6415 доноров. Из 6415 доноров 6085 (94,86%) были резус-положительными и 330 (5,144%) резус-отрицательными []. Среди 330 резус-D-отрицательных лиц 05 (1.51%) были положительными на слабый D-антиген, а остальные были отрицательными []. Частота резус-отрицательности составила 25,76% среди групп крови, 25,15% среди В, 07,88% среди АВ и 41,21% среди О группы крови []. Слабоположительные по антигену D люди среди фенотипа группы крови A составляли 0,60% от общего числа Rh D-отрицательных, 0,91% среди B и ноль среди групп AB и O [].

Таблица 1

Таблица 1

Частота резус D антигена в здоровых донорах

1 5 5.14
Количество доноров Частота (%)
RH D D D4 6085 94.86
RH D DITAL 330
4 100

Таблица 2

Частота слабого D антигена Desisus d отрицательные доноры

Группа Количество доноров Частота (%)
d u d u 40114

5
1.51
d u отрицательный 325 98.48
Total 330 330 100

Частота RH D D Отказ от або крови

Таблица 3

Частота слабых D антигена, положительный среди группы ABO

u
ABO отрицательная группа d u Частота (%) Общий RH D D отрицательный
1
Отрицательный 2 0,60114
B Отрицательный 3 0.91
AB отрицательный 0 0
O отрицательный 0 0
Total
5 5 1.51

Обсуждение

Слабый d фенотип ослабленная форма D-антигена, которая при рутинном тестировании на D-антиген будет реагировать с некоторыми анти-D, но не с другими (при инкубации при 37°C или немедленном центрифугировании). Слабые D эритроциты содержат антиген D, но в меньшем количестве по сравнению с нормальными Rh D-положительными эритроцитами.По определению, слабые эритроциты D экспрессируют все эпитопы D на низком уровне, и люди со слабым фенотипом D не могут вырабатывать анти-D. Эритроциты, имеющие слабый фенотип D, для большинства целей переливания следует рассматривать как RhD-положительные. Слабые D-эритроциты имеют меньше D-сайтов на клетку, чем нормальные RhD-положительные эритроциты [1].

Молекулярная основа слабого D-антигена

Rh-антигены кодируются двумя близко сцепленными генами с гомологией последовательностей 92%. RhD кодирует антиген D, а RHCE — антигены Cc и Ee.Каждый состоит из 10 экзонов, и, что необычно для гомологичных генов, два гена находятся в противоположной ориентации на хромосоме. Каждый ген кодирует полипептид из 416 аминокислот с молекулярной массой 30–32 кДа, который является пальмитоилированным, но не гликозилированным. Полипептиды, кодируемые RhD и RHCE, различаются на 31–35 аминокислот в зависимости от генотипа RHCE [1].

Резус-D-отрицательный фенотип обычно связан с отсутствием всего белка D в мембране эритроцитов. Это объясняет, почему D является настолько иммуногенным, поскольку антиген D содержит многочисленные эпитопы на внешних доменах белка D.У белых людей D-отрицательный фенотип почти всегда является результатом гомозиготности по полной делеции RhD. D-положительные являются либо гомозиготными, либо гетерозиготными по наличию RhD. У африканцев, в дополнение к делеции RhD, отрицательный D часто является результатом неактивного RhD, содержащего стоп-кодоны трансляции в пределах рамки считывания. Другие гены, содержащие инактивирующие мутации, также обнаружены у D-негативных африканцев и азиатов [2].

Слабый D и частичный D — это два варианта антигена D, зависящие от вариабельной экспрессии антигена D из-за большого количества аллелей RhD.Слабый D и частичный D приводят к количественным и качественным изменениям Rh-белка соответственно [3]. Flegel [4] указал, что слабые D типы 1, 2, 3, 4.0, 4.1 и 5 могут рассматриваться как резус-положительные и переливать резус-положительную кровь. Однако слабые D типы 4.2–11 и 15 следует расценивать как резус-отрицательные и переливать резус-отрицательную кровь. Частичный D может вызывать выработку специфических антител. Таким образом, в таких ситуациях частичный D следует считать резус-отрицательным [5]. В нашем центре молекулярные тесты для определения слабых D-типов отсутствовали.

У лиц со слабым фенотипом D могут обнаруживаться аминокислотные замены во внутриклеточном и трансмембранном белковом сегменте Rh-антигена [6]. Исследование, проведенное в Тайване с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) — полиморфизма длины рестрикционных фрагментов и прямого секвенирования, выявило четыре типа мутаций, связанных со слабым D-антигеном [7]. В то время как некоторые исследователи наблюдали, что аберрантные белки RhD из-за аллелей RhD могут приводить к измененным антигенам [6], некоторые другие исследователи утверждали, что снижение экспрессии мРНК RhD приводило к слабому фенотипу D [8].

Важно, чтобы анти-D типирующие реагенты выявляли большинство слабых фенотипов D, особенно у доноров крови, хотя очень слабые формы D будут типироваться как резус-отрицательные. Самая слабая форма слабого D, называемая DEL, может быть обнаружена только серологически с помощью тестов на абсорбцию и элюирование.

Когда резус-фенотип человека известен, можно определить вероятный генотип и рассчитать его вероятность на основе известных частот генотипов в той же популяции. Очень важно, чтобы при определении вероятного генотипа было известно этническое происхождение человека, так как цифры для одной популяции не будут применяться к людям из других популяций.Например, в белых популяциях dce встречается в 15 раз чаще, чем Dce, тогда как в африканских популяциях Dce имеет несколько более высокую частоту, чем dce [1].

В Соединенном Королевстве рекомендуемый метод D-типирования пациентов требует прямой реакции агглютинации в двух повторах с мощными моноклональными анти-D-реагентами IgM. Антиглобулиновый тест не требуется. Это означает, что очень слабые D-эритроциты будут типизированы как D-отрицательные. Это не считается важным, поскольку пациенту безвредно переливают D-отрицательные эритроциты.Доноров больше не типируют на D с помощью антиглобулинового теста, поскольку в этом нет необходимости, поскольку маловероятно, что переливание очень слабых D-эритроцитов D-отрицательному пациенту приведет к иммунизации пациента [1].

Частота резус-отрицательности и слабого фенотипа D

Частота резус-отрицательности варьируется от 5% до 25% во всем мире, а частота слабого D-антигена колеблется от 0,2% до 1%. В нашем исследовании резус-отрицательность составила 5,14%, тогда как в исследовании из Лахора было 19,4% [9] и всего 2.7% в исследовании из Северной Нигерии [10]. Результаты нашего исследования сопоставимы с 6,3% резус-отрицательностью в аналогичном исследовании в Индии [11]. Другое исследование показало 12,62% резус-отрицательности в Уттаракханде, Индия [12]. У 0,3–0,5% индийского населения выявлена ​​слабая Д, в то время как заболеваемость в Европе составляет 0,23–0,5%, а в США — 3% [13].

В нашем исследовании частота слабого фенотипа D была несколько выше (1,51%). Аналогичные исследования показали заболеваемость 0,189% в Индии и единственный случай слабого положительного результата D в исследовании из Уттаракханда, Индия [12], где заболеваемость равнялась 0.135%. Высокая частота слабого D наблюдалась в исследовании из Нигерии [11]. Использование сильнодействующих моноклональных анти-D-реагентов может объяснить несколько более высокую частоту выявления слабого D-антигена. Моноклональные реагенты с высокой чувствительностью выявляют резус-D-положительные клетки, которые трудно обнаружить с помощью поликлональных реагентов с низкой чувствительностью [14].

Прикладные аспекты и молекулярные методы

Поскольку антиген RhD обладает высокой иммуногенностью, молекулярное определение статуса аллеля RhD очень важно, учитывая высокий уровень иммунизации резус-отрицательных лиц резус-положительными трансфузированными эритроцитами [5, 15].У большинства Rh D-отрицательных людей отсутствует весь Rh D-белок в их эритроцитах, и при иммунизации резус-D-положительными эритроцитами они могут вырабатывать к нему антитела.

Серологически слабый фенотип D оценивается в 0,2–1,0% в США; Политика определения фенотипов RhD у потенциальных реципиентов крови потенциально может снизить потребность в десятках тысяч единиц резус-отрицательных эритроцитов ежегодно в Соединенных Штатах (12 миллионов единиц в год, умноженных на 15% резус-отрицательных, умноженных на 1% серологических слабых D-фенотипов). умножить на 95% генотипов RhD, не требующих резус-отрицательных, умножить на 1–2 ЕД, перелитых каждому пациенту) [16].

В исследовании, проведенном в Северной Европе, 8442 D-отрицательных донора крови были проверены с помощью специфичного для последовательности RhD PCR-праймирования (PCR-SSP). RhD-PCR-положительные образцы были дополнительно охарактеризованы с помощью RhD-экзон-специфичной PCR-SSP или секвенирования. Выявлено 50 резус-положительных образцов. Пятнадцать образцов содержали один из трех новых аллелей D el. Тридцать образцов были обусловлены 14 различными D-негативными аллелями, только 5 из которых были ранее известны. Кумулятивная популяционная частота 14 D-негативных аллелей составила 1:1500.Пять образцов представляли собой химеру D±, слабую D и три частичных D, которые были пропущены обычной серологией; двое реципиентов, перелитых кровью донора-химеры D±, были иммунизированы анти-D [17]. Тем не менее, эти молекулярные методы для фенотипов RhD все еще представляют собой видение ближайшего будущего в развивающихся странах, таких как Индия.

Тестирование слабого антигена D имеет особое значение у пациентов с хронической потребностью в переливании крови, таких как талассемия, серповидно-клеточная анемия, хроническая почечная недостаточность, ВИЧ/СПИД.Если эти Rh D-отрицательные лица оказываются положительными на слабый D-антиген, им можно переливать резус-D-положительную кровь. Этот прикладной аспект может иметь особое значение в северной Индии, где распространена талассемия. Однако следует позаботиться о том, чтобы тестирование на слабый антиген D проводилось в строго контролируемых лабораторных условиях, поскольку ложноположительные результаты могут привести к непреднамеренному переливанию Rh D-положительной крови таким резус-D-отрицательным пациентам с серьезными иммунологическими и клиническими последствиями.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Хотя частота слабого антигена D низка, его сильная иммуногенность делает прикладные аспекты чрезвычайно важными с клинической точки зрения. Риск аллоиммунизации остается, если слабая кровь с положительным антигеном D переливается резус-D-отрицательному человеку. Это становится серьезной проблемой, если реципиент находится в детородном возрасте и может привести к гемолитической болезни новорожденного при последующей беременности. Людей со слабым антигеном D рекомендуется рассматривать как резус-положительных при представлении в качестве донора и резус-отрицательных при представлении в качестве реципиента.

Ограничения исследования

Исследование проводилось в условиях стационара со здоровыми донорами, преимущественно мужчинами. Для подтверждения истинной распространенности необходимы дальнейшие перекрестные исследования в более широком сообществе. Редкие частичные фенотипы D могут проявлять сильную реактивность с некоторыми моноклональными сыворотками и не могут быть дифференцированы от истинного D-положительного фенотипа.

Финансовая поддержка и спонсорство

Нет.

Конфликт интересов

Конфликт интересов отсутствует.

Значение в банках крови:

Значение слабого фенотипа D в банках крови следующее:

  1. Слабый D в качестве донора крови : В качестве доноров слабые D эритроциты считаются Rh(D)-положительными, поскольку, несмотря на то, что антиген D слабый, он присутствует. Если слабые D-эритроциты были перелиты D-отрицательным пациентам, пациенты могли быть иммунизированы для выработки анти-D. Некоторые службы переливания крови присваивают донорам со слабым D статус «резус-положительный, слабый D».»

  2. Weak D в качестве реципиента крови : В качестве реципиентов пациенты со слабым фенотипом D считаются Rh(D)-отрицательными и обычно получают только Rh(D)-отрицательные эритроциты. Это связано с тем, что слабый D мозаичного типа, такой как D AB , может продуцировать анти-D (анти-D CD ) при введении D ABCD эритроцитов от нормального Rh(D)-положительного донора (хотя это вряд ли). Примечание : Если слабый человек D фенотипирует как Rh(D)-положительный, Rh(D)положительные донорские клетки будут перелиты.

  3. Слабый D в отношении пренатального тестирования : Rh(D)-отрицательной женщине вводят резус-отрицательный иммуноглобулин, если у нее Rh(D)-положительный младенец и у нее не вырабатываются активные анти-D. Резус-иммуноглобулин также можно вводить, если у Rh(D)-отрицательной женщины рождается слабый D-положительный ребенок, потому что слабые D-эритроциты теоретически могут вызывать выработку анти-D, хотя как часто это происходит, неизвестно (и, вероятно, редко).

    Правила типирования беременных женщин для слабого D (D u ) различаются в зависимости от страны и протоколов введения резус-иммуноглобулина.Например, в США Стандарты Американской ассоциации банков крови (AABB) определяют, что беременные женщины с отрицательным резус-фактором должны быть проверены на слабый D; если резус-положительный или слабый D, они считаются резус-положительными и не являются кандидатами на резус-иммуноглобулин.

    Напротив, Стандарты Канадского общества трансфузионной медицины (CSTM) не требуют слабого D-типирования для беременных женщин. При резус-отрицательном или слабом D такие женщины являются кандидатами на резус-иммуноглобулин.Теоретически, хотя и крайне редко, слабые D-люди мозаичного типа могут вырабатывать анти-D.

    Общепризнана необходимость проведения слабого теста D у новорожденных из , которые имеют отрицательный резус-фактор и рождены от резус-отрицательных женщин. Необходим слабый тест D у младенца, поскольку матери будут получать иммуноглобулин Rh, если у ребенка слабый D. достаточно мощный, чтобы обнаружить слабый фенотип D без проведения теста D u .)


Значение в банках крови

Слабый D (Du) фенотип

Определение : Слабый фенотип D (D u ) представляет собой ослабленную форму антигена D, которая при обычном типировании D будет реагировать с некоторыми анти-D, но не с другими (при немедленном вращении или инкубации при 37°). ). Слабые эритроциты D имеют антиген D, но имеют меньше антигенов D на клетку, чем нормальные резус-положительные клетки.В настоящее время предпочтительным термином для D и является «слабый D». Частота слабого фенотипа D у европеоидов составляет примерно 0,3% (3 на 1000). Однако частота зависит от используемого метода, используемого реагента и тестируемой расовой смеси, поскольку частота слабого D среди чернокожих выше, чем у белых.

Наследство

Исторически считалось, что слабый фенотип D возникает из-за трех механизмов, которые рассматриваются здесь, поскольку они помогают объяснить, как банкиры крови пришли к мысли о слабом D и переливании крови:

  1. Взаимодействие генов (тип позиции)
  2. Мозаичный тип (частичный D)
  3. Наследственный

Сегодня молекулярная основа слабого D в значительной степени решена.См. эти превосходные ресурсы:

Значение в банках крови:

Метод слабого фенотипирования D (тестирование D

и )

Как было определено ранее, слабые D-эритроциты реагируют с некоторыми анти-D, но не с другими в рутинных типирующих тестах. Способ надежного обнаружения слабых D-клеток состоит в том, чтобы провести тест на слабые D (обычно называемый тестом D u ). Тест D u представляет собой непрямой антиглобулиновый тест с использованием эритроцитов пациента и IgG анти-D. Необходимо использовать IgG анти-D, поскольку антиглобулиновая сыворотка содержит анти-IgG.Тест D u , как и другое типирование антигена, проводимое с использованием антиглобулинового теста, контролируется путем проведения DAT на тестируемых клетках. DAT служит автоконтролем, который показывает, сенсибилизированы ли тестируемые клетки антителом in vivo. Если DAT положительный, тест D u недействителен, так как он будет положительным независимо от того, является ли пациент слабым D. Для типирования D u можно использовать любой IgG анти-D; обычно это означает, что подходят все типирующие сыворотки, кроме солевой анти-D.

Weak D обсуждается далее в статьях, связанных с заданием 2.


Слабый D (D u ) Фенотип

Иммунопрофилактика резус-фактора у женщин с серологически слабым фенотипом D | Лабораторная медицина

Аннотация

Стандартной практикой для беременных резус-отрицательных женщин, у которых еще не сформировались анти-D, является дородовая резус-иммунопрофилактика, а в случае рождения резус-положительного новорожденного — послеродовая резус-иммунопрофилактика.По оценкам, от 0,6% до 1,0% белых женщин имеют эритроциты, которые экспрессируют серологически слабый фенотип D. Из этих женщин примерно 80% будут иметь слабый тип D 1, 2 или 3, который можно безопасно лечить как резус-положительный. Обзоры лабораторной практики выявляют отсутствие стандартов для интерпретации типа резус-фактора у женщин с серологически слабой Д и для определения потребности в резус-иммунопрофилактике. Генотипирование RhD рекомендуется для определения молекулярной основы серологических слабых фенотипов D у беременных в качестве основы для определения их кандидатуры на резус-иммунопрофилактику.

Chown 1 впервые продемонстрировал, что фетальные эритроциты (эритроциты) могут проникать через плаценту и попадать в кровоток матери, вызывая фетоматеринское кровотечение (FMH). При RhD-несовместимой беременности FMH резус-положительных эритроцитов плода у резус-отрицательной матери может привести к аллоиммунизации матери антигеном группы крови D и образованию анти-D. Во время последующих беременностей с RhD-положительными плодами эта серологическая несовместимость может привести к гемолизу D+ эритроцитов плода и клиническому спектру гемолитической болезни плода/новорожденного (ГБН).

Частота и объем FMH увеличиваются с гестационным возрастом и связаны с рядом провоцирующих факторов, включая травму, многоплодную беременность и инвазивные процедуры. В большинстве случаев причина FMH, приводящая к образованию анти-D, неизвестна. 2 Прошло более 50 лет с тех пор, как в литературе был описан первый вариант антигена группы крови D (D u ). 3 На сегодняшний день описано более 75 молекулярных вариантов антигена D.Эти вариантные антигены имеют уникальные генетические последовательности, многие из которых экспрессируют серологически слабый фенотип D с помощью стандартных методов типирования RhD. Аллоиммунизация матери к антигену группы крови D является наиболее частой причиной клинически значимой ГБПН; однако ГБПН может быть вызвана другими несовместимостями матери и плода по системе ABO, Rh, Kell и другим группам крови.

В Соединенных Штатах политика дородовой и послеродовой иммунопрофилактики Rh с помощью Rh-иммуноглобулина (RhIg) оказалась очень успешной для предотвращения Rh HDFN.Хотя недавних проспективных клинических испытаний не проводилось, насколько нам известно, лабораторные и акушерские методы на 98,4–99,0% успешны в предотвращении образования анти-D у резус-отрицательных матерей вследствие FMH. 4 Тем не менее, результаты проверок квалификации лабораторий свидетельствуют об отсутствии стандартных практик для проведения рутинного типирования RhD, а также для интерпретации типа RhD в случае обнаружения слабого серологического фенотипа D. 5,6 По оценкам, до 1% белых женщин имеют серологически слабый фенотип D. 7 Учитывая отсутствие в настоящее время стандартной лабораторной практики, женщина с серологически слабым фенотипом D, которая рожает RhD-положительного новорожденного, может соответствовать требованиям и получать RhIG в некоторых больницах, но может не соответствовать требованиям или получать RhIG в других больницах, в зависимости от политик рассматриваемых лабораторий.

В этом обзоре мы обобщаем рекомендуемую лабораторную практику проведения резус-иммунопрофилактики с помощью RhIG у резус-отрицательных женщин. Кроме того, мы описываем соответствующие особенности молекулярной структуры антигена RhD, которые обеспечивают обновленную основу для управления иммунопрофилактикой резус-фактора у женщин с серологически слабым фенотипом D.

Иммунопрофилактика резус-фактора у резус-отрицательных женщин

В США дородовой RhIG обычно вводят на 28-й неделе беременности беременным RhD-отрицательным женщинам, у которых еще не сформировались анти-D. 8,9 Эта предродовая доза вводится в качестве стандартной тактики всем беременным RhD-отрицательным девочкам и женщинам, вынашивающим RhD-положительный плод или плод с неопределенным RhD-статусом. Напротив, послеродовой RhIG вводят в виде дозы, которая определяется индивидуально с помощью 4-этапной лабораторной процедуры, состоящей из проведения розеточного скрининга фетальных эритроцитов на наличие FMH, количественного определения FMH с помощью анализа кислотной элюции (Kleihauer-Betke), оценки объема FMH и расчет дозы RhIG (количество флаконов по 300 мкг анти-D). 10

Первый этап, розеточный скрининг эритроцитов плода, включает проведение высокочувствительного качественного анализа, который может обнаружить небольшое количество эритроцитов плода D+ среди большого количества эритроцитов D-матери. 11–13 Исследования 11 продемонстрировали, что розеточный скрининг эритроцитов плода может обнаруживать FMH объемом 5 мл или более в кровотоке матери. Розеточный скрининг эритроцитов плода на наличие D+ эритроцитов эффективен только в том случае, если мать является резус-отрицательной, а новорожденный резус-положительным.Анализ недостаточно чувствителен для выявления значительного FMH, если плод имеет слабый фенотип D. 2 Для проведения анализа к образцу отмытых эритроцитов матери добавляют реагент иммуноглобулин (Ig)M анти-D. D+ (R 2 r) индикаторные эритроциты добавляют в препарат и прикрепляются в виде агглютинатов («розеток») к IgM-покрытым D+ фетальным эритроцитам в материнской крови, улучшая их визуализацию (FMH RapidScreen, Immucor, Norcross, GA) ( Изображение 1 и Изображение 2). Если в 5 полях малого увеличения наблюдается 5 и более агглютинатов эритроцитов, результат теста положительный и требует количественного определения. 3

Изображение 1

Положительные результаты скрининга розеточных эритроцитов плода. Фето-материнское кровотечение объемом 30 мл моделировали путем смешивания 0,6% D+ эритроцитов плода (пуповины) с D-эритроцитами взрослых. Обнаружение эритроцитов плода D+ было усилено добавлением реагента иммуноглобулина (Ig)M анти-D и индикаторных эритроцитов D+ (стрелки; неокрашенные; исходное увеличение ×10).

Изображение 1

Положительные результаты скрининга розеточных эритроцитов плода. Было смоделировано 30 мл фетоматеринского кровотечения путем смешивания 0.6% эритроцитов плода (пуповины) D+ с эритроцитами взрослых D+. Обнаружение эритроцитов плода D+ было усилено добавлением реагента иммуноглобулина (Ig)M анти-D и индикаторных эритроцитов D+ (стрелки; неокрашенные; исходное увеличение ×10).

Изображение 2

Положительные результаты скрининга розеточных эритроцитов плода. Большое увеличение, иллюстрирующее совокупность («розетку») эритроцитов-индикаторов D+, окружающих эритроциты плода (пуповины) D+, покрытые иммуноглобулином (Ig)M анти-D, в смоделированном эпизоде ​​30-мл фетоматеринского кровотечения (FMH) (неокрашенный; исходное увеличение × 80).

Изображение 2

Положительные результаты скрининга розеточных эритроцитов плода. Большое увеличение, иллюстрирующее совокупность («розетку») эритроцитов-индикаторов D+, окружающих эритроциты плода (пуповины) D+, покрытые иммуноглобулином (Ig)M анти-D, в смоделированном эпизоде ​​30-мл фетоматеринского кровотечения (FMH) (неокрашенный; исходное увеличение × 80).

Если результаты розеточного скрининга эритроцитов плода положительны, вторым этапом является повторное тестирование того же образца крови для оценки объема FMH с помощью количественного анализа кислотного элюирования. 14 Анализ кислотной элюции основан на повышенной устойчивости фетального гемоглобина (HbF) к кислотной элюции по сравнению со взрослым HbA. 15 Для проведения анализа образец материнской крови фиксируют на предметном стекле, обрабатывают забуференной лимонной кислотой и окрашивают эритрозином-В и быстрым зеленым (набор для окрашивания клеток плода, Simmler, Inc., Хай-Ридж, Миссури). 13 Взрослые эритроциты становятся бледно-розовыми «призрачными» клетками по мере элюирования HbA. Эритроциты плода остаются окрашенными в темно-розовый цвет из-за стабильности HbF в растворе кислоты (Изображение 3).Под микроскопом подсчитывают не менее 2000 эритроцитов, и результат сообщается как процент фетальных эритроцитов в образце крови. 14 Из-за субъективной конечной точки считывания анализ подвержен ошибкам в интерпретации. 6,7,11,16 Анализ также может привести к завышению количества эритроцитов плода, если у матери повышено количество эритроцитов, содержащих повышенный процент HbF (F-клеток). Такая ситуация может возникать из-за гемоглобинопатических проявлений, вариабельной персистенции фетального гемоглобина и повышения HbF вследствие беременности. 17

Изображение 3

Результаты анализа кислотной элюции с использованием имитации 30 мл фетоматеринского кровотечения (FMH). Фетальный гемоглобин (HbF)-содержащие эритроциты (эритроциты) плода (пуповины) сохраняют свое темно-розовое окрашивание после элюирования кислотой. HbA-содержащие эритроциты взрослых выглядят как слегка окрашенные («фантомные») эритроциты после элюирования HbA (окрашивание на эритрозин-В и быстрое окрашивание в зеленый цвет; исходное увеличение ×40).

Изображение 3

Результаты анализа кислотного элюирования с использованием имитации 30 мл фетоматеринского кровотечения (FMH).Фетальный гемоглобин (HbF)-содержащие эритроциты (эритроциты) плода (пуповины) сохраняют свое темно-розовое окрашивание после элюирования кислотой. HbA-содержащие эритроциты взрослых выглядят как слегка окрашенные («фантомные») эритроциты после элюирования HbA (окрашивание на эритрозин-В и быстрое окрашивание в зеленый цвет; исходное увеличение ×40).

Проточная цитометрия предлагает лучшую альтернативу для количественного определения FMH по сравнению с анализами с кислотным элюированием. 16 Тем не менее, немногие больничные лаборатории могут перейти на внутрибольничное тестирование ФМГ с помощью проточной цитометрии, потому что небольшой объем тестов, необходимых для количественного определения случайных больших объемов ФМГ, не оправдывает первоначальные и текущие расходы.Кроме того, требование о том, что послеродовой RhIG должен быть введен в течение 72 часов после родов, является логистическим препятствием для направления тестирования FMH в референс-лабораторию для количественного определения методом проточной цитометрии.

Третий шаг – оценка объема FMH по одной из нескольких предложенных формул. Наиболее широко используемая формула приведена в Техническом руководстве AABB : 14

Объем FMH (мл цельной крови) = объем материнской крови × процент эритроцитов плода (результат анализа кислотного элюирования) общий объем крови принимается равным 5000 мл; однако точный объем материнской крови можно рассчитать по росту и весу матери.Четвертый шаг – это расчет количества флаконов RhIG следующим образом:

Количество флаконов = объем FMH/30 мл

30 мл в этой формуле представляет собой объем цельной крови плода (FWB), который можно предотвратить образование анти-D, если матери своевременно ввести содержимое 1 флакона RhIG (300 мкг анти-D). Для корректировки изменчивости в количественном определении кислотного элюирования и расчете FMH Техническое руководство AABB рекомендует следующие корректировки при расчете дозы RhIG: 14

  1. Если число справа от десятичной точки меньше 5, округлить до следующего целого числа (пример: если результат вычисления равен 1.4, дайте 2 дозы).

  2. Если число справа от запятой больше или равно 5, округлите до следующего целого числа и прибавьте 1 (пример: если результат расчета равен 1,6, дайте 3 дозы).

Результаты проверки квалификации показывают, что многие лаборатории допускают ошибки при расчете рекомендуемой дозы RhIG. 6,7 Эти ошибки можно свести к минимуму с помощью RhIg Dose Calculator, онлайн-приложения (www.cap.org), которое преобразует результат анализа с кислотным элюированием или проточной цитометрии (процент фетальных эритроцитов среди взрослых эритроцитов) в рекомендуемая доза RhIG (количество ампул по 300 мкг анти-D). 18,19 Калькулятор исходит из того, что общий объем крови матери составляет 5000 мл. Кроме того, рост и вес матери можно ввести вручную для большей точности.

Иммунопрофилактика резус-фактора у женщин с серологически слабым фенотипом D

Серологический слабый фенотип D определяется как слабая или отсутствующая реактивность эритроцитов с реагентом анти-D (≤2+) при начальном тестировании, но сильная или умеренная реактивность (от 3+ до 4+) при добавлении античеловеческого глобулина. 20,21 Снижение реактивности эритроцитов с серологически слабым фенотипом D отражает аминокислотную замену во внутриклеточном или трансмембранном домене белка RhD, что приводит к количественному снижению экспрессии на поверхности эритроцитов. 22,23 Хотя примерно от 0,6% до 1,0% белых людей имеют эритроциты, которые экспрессируют слабый серологический фенотип D, 6 в Соединенных Штатах не существует стандартной практики ведения Rh-иммунопрофилактики у женщин с серологическим слабым фенотипом D . 6,7 В самом последнем практическом руководстве Американского колледжа акушеров и гинекологов от 1999 г. рекомендуется, чтобы женщины с серологическим слабым фенотипом D классифицировались как RhD-положительные и не должны получать RhIG. 24 В последнем издании Стандартов AABB для банков крови и служб переливания крови (2014 г.) слабый тест D для пациентов, включая беременных женщин, считается «ненужным», хотя слабый тест D требуется для эритроцитов плода или новорожденного от резус-отрицательной матери, чтобы определить, должна ли мать быть кандидатом на RhIG. 25 Таким образом, беременная женщина, унаследовавшая серологически слабый фенотип D и типирование резус-фактора которой проводилось в лаборатории, не выполняющей тест слабого D, получит отчет о том, что она является резус-отрицательной и подходит для RhIG.

Недавние исследования молекулярной структуры антигена RhD позволяют сформулировать обновленные рекомендации, основанные на геномной науке, для послеродовой иммунопрофилактики резус-фактора у женщин с серологически слабым фенотипом D.Рабочая группа, состоящая из серологов, молекулярных ученых и акушеров, рекомендовала, чтобы всякий раз, когда рутинное типирование RhD выявляло, что пациент, включая беременную женщину, имел серологический слабый фенотип D, выполнялось лабораторное тестирование с использованием молекулярного метода для определения слабого D. тип для этого пациента. 21 Исследования, проведенные в Центральной Европе с использованием молекулярных методов, показали, что у людей со слабым фенотипом D 1, 2, 3, 4.0 или 4.1, которые охватывают 95% фенотипов слабого D в белом населении, никогда не сообщалось о формировании анти-D, несмотря на беременность и переливание крови. 21 Напротив, аллоиммунизация была зарегистрирована для некоторых других слабых типов D, включая слабый D типа 4.2, типы DAR, тип 11, тип 15, тип 21 и тип 57. 21 Рабочая группа рекомендовала женщинам с серологический слабый фенотип D, связанный со слабым D типом 1, 2 или 3, может безопасно лечиться как RhD-положительный и не должен получать RhIG. 21 Иммуногенность слабых D типов 4.0 и 4.1 все еще исследуется; рабочая группа не рекомендовала добавлять его в резус-положительную категорию. 21 Ни одно исследование не показало, что RhIG может предотвратить аллоиммунизацию RhD D+ эритроцитами при переливании крови или во время беременности у лиц со слабыми вариантами D, которые были связаны с образованием анти-D. 26 Однако, учитывая очень низкий риск нежелательных явлений от инъекции RhIG и принимая во внимание возможную пользу от предотвращения аллоиммунизации Rh, женщинам с этими слабыми типами D рекомендуется предлагать потенциальную пользу RhIG .21, 26

Ежегодно в Соединенных Штатах примерно 16 700 беременных женщин с серологически слабым фенотипом D имеют резус-тип, который интерпретируется как резус-отрицательный; следовательно, эти женщины получают Rh-иммунопрофилактику с дородовыми и послеродовыми инъекциями RhIG. 21 Если бы у всех этих женщин был слабый результат теста D при типировании RhD во время их первоначального пренатального обследования, и если бы те, у кого был серологически слабый фенотип D, подверглись бы генотипированию RhD, приблизительно 13 360 (80,0%) были бы определены иметь слабый тип D 1, 2 или 3 и не требовать RhIG. С учетом количества флаконов RhIG, необходимого для рутинной дородовой и послеродовой иммунопрофилактики RhD, а также дополнительных инъекций RhIG при кровотечениях во время беременности, получается, что беременные женщины в США ежегодно получают 24 700 ненужных инъекций RhIG. 21

Заключение

Когда при обычном типировании RhD обнаруживается, что беременная женщина имеет серологически слабый фенотип D, слабый тип D для этой пациентки должен быть определен с помощью генотипирования RhD. Женщины с серологическим слабым фенотипом D, ассоциированным со слабым D типа 1, 2 или 3, могут безопасно лечиться как резус-положительные и не нуждаются в резус-иммунопрофилактике. Отсутствуют данные о ведении иммунопрофилактики резус-фактора, когда слабый тип D отличается от 1, 2 или 3, и пациенты с такой классификацией должны лечиться как резус-отрицательные и получать обычную иммунопрофилактику резус-фактора.Поскольку генотип RhD передается по наследству, результаты должны быть зарегистрированы в медицинских картах пациенток и не должны повторяться при будущих беременностях. Результаты генотипирования резус-фактора не только определят более точное управление иммунопрофилактикой резус-фактора, но также определят более подходящий выбор группы крови с резус-фактором, необходимой, если в будущем потребуются переливания.

Сокращения

  • Эритроциты
  • ФМГ
  • HDFN гемолитической болезни плода / новорожденного

  • RhIg
  • Ig
  • HbF
  • FWB

Список литературы 1

.

Анемия вследствие кровотечения плода в кровоток матери

.

Ланцет

.

1954

;

263

:

1213

1215

.2

.

Фето-материнское кровотечение: частота, фактор риска, время возникновения и клинические последствия

.

Переливание

.

1990

;

30

:

344

357

.3

Вкладыш, FMH RapidScreen

.

Иммукор

,

Норкросс, Джорджия

.4

.

Новый аллеломорф Rh

.

Природа

.

1946

;

158

:

25

26

.5

.

Тридцать пять лет профилактики резус-фактора

.

Переливание

.

2003

;

43

:

1661

1666

.6

для Ресурсного комитета по трансфузионной медицине CAP

.

Политика и процедуры, связанные с тестированием на слабые фенотипы D и введением резус-иммуноглобулина: результаты и рекомендации, относящиеся к дополнительным вопросам комплексного исследования трансфузионной медицины Колледжа американских патологоанатомов

.

Медицинская лаборатория Arch Pathol

.

2014

;

138

:

620

625

.7

.

Неточные дозы резус-иммуноглобулина после резус-несовместимого плодо-материнского кровотечения: обзор лабораторной практики

.

Медицинская лаборатория Arch Pathol

.

2009

;

133

:

465

469

.8

.

Нужно ли нам больше беспокоиться о слабых D-антигенах?

Переливание

2005

;

45

:

1547

1551

.9

.

Антенатальная профилактика резус-изоиммунизации: программа обслуживания при сроке беременности 28 недель

.

Can Med Assoc J

.

1978

;

118

:

627

630

.10

.

Использование резус-иммуноглобулина: практический параметр ASCP

.

Ам Дж. Клин Патол

.

1998

;

110

:

281

292

.11

.

Послеродовая иммунопрофилактика резус-фактора

.

Акушерство Гинекол

.

2012

;

120

:

1428

1438

.12

и другие. .

Обнаружение фетоматеринского кровотечения: сравнение пяти методов

.

Переливание

.

1991

;

31

:

303

307

.13

.

Лабораторные методы рН-иммунопрофилактики: обзор

.

Иммуногематология

.

2010

;

26

:

92

103

.14

ред.

Техническое руководство

. 18-е изд.

Bethesda, MD

:

AABB

;

2014

.15

.

Выявление фетального гемоглобина в эритроцитах мазка крови [на немецком языке]

.

Клин Вохеншр

.

1957

;

35

:

637

638

.16

для Колледжа американских патологов Ресурсный комитет по трансфузионной медицине

.

Квалификационные тесты выявили необходимость улучшения лабораторных анализов фетоматеринских кровотечений для иммунопрофилактики резус-фактора

.

Переливание

.

2013

;

53

:

2098

2102

.17

.

Уровни гемоглобина плода у взрослых

.

Кровь Ред.

.

1994

;

8

:

213

224

.18

.

Придание новой силы расчетам RhIg

.

CAP Сегодня

.

2008

;

22

:

1

,

66

,

68

,

70

.19

Калькулятор дозы RhIg

.

Веб-сайт Колледжа американских патологов

. . Дата обращения: 13 марта 2015 г. 20

.

Молекулярная генетика и клиническое применение RH

.

Transfus Apher Sci

.

2011

;

44

:

81

89

.21

и другие. .

Пришло время поэтапно проводить генотипирование RHD для пациентов с серологически слабым фенотипом D

.

Переливание

.

2015

;

55

:

680

689

.22

.

Молекулярная основа слабых фенотипов D

.

Кровь

.

1999

;

93

:

385

393

.23

.

Как я веду доноров и пациентов со слабым фенотипом D

.

Карр Опин Гематол

.

2006

;

13

:

476

483

.24

.

Американский колледж акушеров и гинекологов. Профилактика аллоиммунизации RhD. № 4, май 1999 г. (заменяет образовательный бюллетень № 147, октябрь 1990 г.)

.

Int J Gynecol Obstet

.

1999

;

66

:

63

70

.25

, изд.

Стандарты для банков крови и служб переливания крови

. 29-е изд.

Bethesda, MD

:

AABB Press

;

2014

.26

.

Варианты RhD — текущее тестирование и клинические последствия

.

Брит Дж. Гематол

.

2013

;

161

:

461

470

.

© Американское общество клинических патологов

Ваше путешествие в лабораторию с резус-системой и Weak D

Мэтт Доусон: Привет, меня зовут Мэтт Доусон, и добро пожаловать в ORTHO Science BYTES! Сегодня ко мне присоединился Тони Казина. Привет, Тони, спасибо, что присоединился к нам сегодня, можешь рассказать всем немного о себе?

Тони Казина: Спасибо, Мэтт. Привет всем, для тех из вас, кто меня не знает, я занимаюсь трансфузионной медициной в качестве банкира крови и иммуногематолога чуть более 40 лет.За эти годы в мире иммуногематологии произошло много достижений и инноваций. Многие из них будут обсуждаться во время этих подкастов.

Мэтт Доусон: Отлично! Итак, давайте перейдем к первой теме, для прохождения которой потребуется несколько подкастов, Rh(D) и ее сложности. В этом выпуске мы поговорим о слабом тесте D и о том, почему донорам или некоторым пациентам с резус-отрицательной группой крови целесообразно пройти дополнительный подтверждающий тест (слабый тест D) и почему это имеет клиническое значение.Тони, можешь сначала провести нас в увлекательное путешествие по захватывающей истории этой сложной системы крови.

Тони Касина: Конечно, Мэтт, все началось в 1939 году, когда Левин и Стетсон обнаружили у матери, у которой был мертворожденный ребенок, и последующую трансфузионную реакцию при переливании крови ее мужа наличие антител. Это антитело реагировало примерно с 80% протестированных эритроцитов человека. Год спустя Ландштейнер и Вайнер разработали антитело у кроликов/морских свинок, введя им клетки макаки-резуса.Это антитело реагировало примерно с 85% протестированных эритроцитов человека и получило название анти-Rh. Примерно через 2 года было установлено, что эти 2 антитела на самом деле выявляли разные антигены эритроцитов. Доктор Филип Левин предложил назвать антиген, обнаруживаемый антителами резуса, LW в честь докторов Ландштейнера и доктора Вайнера. Итак, название, данное человеческому антителу к Rh, закрепилось необратимо, так как научная литература была захламлена названием Rh. Затем началось расширение резус-системы с дальнейшим открытием дополнительных антигенов в системе и появлением номенклатуры Фишера-Рейса, в которой резус-антиген назывался «D».

Мэтт Доусон: Интересно, а вы знаете, почему он называется Weak D?

Тони Касина: Что ж, Мэтт, Стрэттон позже обнаружил, что не все анти-D реагируют с некоторыми людьми Rh(D+). На самом деле, некоторые не реагировали до использования антиглобулинового теста. Это наблюдение привело к устаревшей терминологии Du. Позднее эта концепция антигена Du была опровергнута, и изменения на уровне гена D были идентифицированы как ответственные за ослабленную экспрессию антигена D.

Мэтт Доусон: Так в чем же цель слабого D-теста?

Тони Казина: Weak D служит двум целям.Во-первых, он описывает тест, который проводится, когда анти-D-реагент дает отрицательный результат при прямом тестировании, а затем инкубируется при 37°C и преобразуется в антиглобулиновый тест для обнаружения присутствия D-антигена, поэтому он называется слабым D-тестом. Слабый D также используется для описания эритроцитов с более низким числом копий экспрессии антигена D по сравнению с тем, что обычно экспрессируется. Как многие из вас знают, терминология Du больше не считается действительной, поскольку в 1992 году Иссит и другие изменили терминологию, чтобы перейти к слабому D.Так что теперь мы говорим, что эритроцит с этим ослабленным выражением является слабой D-клеткой. Только один дополнительный комментарий о терминологии. Иногда вы будете видеть терминологию, выраженную как вариант D. Я считаю, что это термин, охватывающий как слабое D, так и частичное D. Мы поговорим подробнее в следующем подкасте о частичном D и о том, чем оно отличается от слабого D.

Мэтт Доусон: Не могли бы вы провести нас через концептуальный опыт, чтобы лучше понять концепция Weak D?

Тони Казина: Конечно! Я не могу претендовать на концепцию, которую собираюсь использовать, но моя хорошая подруга Сью Джонсон из Центра крови Версити, штат Висконсин, предложила идею кусочков «Резус» после леденцов Риза.Итак, рассмотрим эту аналогию: на большой тарелке, представляющей эритроцит, поместите равное количество желтых, оранжевых и коричневых кусочков Риза, которые будут представлять все части D-антигена, и убедитесь, что они распределены в одинаковых промежутках. разные цвета, полностью покрывающие поверхность пластины. Теперь представьте, что вы вкладываете антитело в свой реагент, закрываете глаза, протягиваете вниз большой и указательный пальцы и берете кусочек резуса. Это должно быть довольно легко сделать. Это представляет собой присутствие антигена D в количестве, которое считается нормальным выражением и обнаруживается при прямом тестировании с реагентами Anti-D.Имейте в виду, что нормальная экспрессия антигена D обычно колеблется в пределах 5000-30000 эпитопов на клетку по сравнению с 70-4000 для того, что считается слабым D. оранжевые, желтые и коричневые части на равном расстоянии друг от друга. Оставшиеся фрагменты теперь представляют собой более низкое число копий экспрессии D-антигена. Теперь закройте глаза и попробуйте взять с тарелки кусочек резуса, на котором кусочков на 80% меньше. Весьма вероятно, что теперь ваша попытка взять кусочек резуса приведет к неудаче и, следовательно, представляет собой отрицательный прямой тест.

Теперь представьте, что антиглобулиновый реагент имеет широко открытые глаза и способен направлять вашу способность «обнаруживать» фрагменты резуса. Это эквивалентно слабому тесту D. Теперь вы можете обнаружить меньшее количество сайтов D-антигена.

Мэтт Доусон: Интересно. Теперь, когда мы концептуально описали, что такое слабый D, давайте поговорим подробнее о слабом тесте D.

Тони Казина: реагент анти-D, который подходит для слабого теста D, будет иметь компонент IgG анти-D, чтобы реагент анти-человеческий глобулин мог обнаруживать присутствие анти-D на эритроците, когда меньшее количество D экспрессируется антиген.Обязательно узнайте свой реагент и прочтите инструкцию по применению для заявлений об использовании в слабом тесте D.

Большинство обнаруженных слабых фенотипов D соответствуют одному из следующих: слабый тип D 1,2,3 или 4.0/4.1. Согласно генотипированию RhD, существует более 155 слабых типов D. Я отсылаю вас к базе данных Rhesus на сайте www.rhesusbase.info для получения подробной информации.

Мэтт Доусон: Так как же возникают слабые D-типы?

Тони Казина: Все начинается, конечно, на уровне ДНК, который затем диктует изменения аминокислот в экспрессируемом белке.Белок RH состоит из 417 аминокислот. Белок проходит через мембрану эритроцитов 12 раз, начиная и заканчивая внутриклеточной мембраной. В белке 6 внеклеточных петель. Изменения в аминокислотах, присутствующих внутри клетки и внутри мембраны, обычно ответственны за количественные изменения в эритроцитах с выраженным меньшим числом копий.

Мэтт Доусон: Мы приближаемся к заключительной части подкаста, и теперь, когда вы знаете, что такое слабый D, как он возникает и как его обнаружить, давайте перейдем к тому, почему он имеет клиническое значение.

Тони Касина: Что ж, Мэтт, хорошо известно, что антиген D может вызывать иммунный ответ, который оказывает клиническое воздействие на пациентов и новорожденных. Имея в виду этот потенциал, есть две ситуации, когда необходим слабый тест D. У доноров, у которых изначально был отрицательный резус-фактор, необходим слабый тест D для выявления присутствия антигена RhD, который присутствует в эритроцитах донора и должен быть помечен как резус-положительный. Затем эти слабые D-положительные клетки переливают резус-положительным пациентам.

Слабый тест D также требуется для младенцев с отрицательным резус-фактором изначально и рожденных от матерей с отрицательным резус-фактором. Это, конечно, важно для того, чтобы убедиться, что если ребенок слабый D-положительный, мать должным образом лечится резус-иммуноглобулином. Конечно, ребенка следует рассматривать как резус-отрицательного для целей переливания.

Иногда есть еще одна причина для слабого D-тестирования, связанная с обнаружением несоответствий, наблюдаемых при тестировании. Это часто более очевидно, когда пациент, у которого ранее был резус-положительный результат, теперь дает отрицательный результат на исторический тест.Может иметь место и обратная ситуация. Существует несколько причин, по которым это может произойти, связанных с используемыми реагентами и методами тестирования, и это, безусловно, является важным фактором при попытке разрешить расхождения D-типирования.

Мэтт Доусон: На ​​этом мы подошли к концу этого подкаста. Как видите, слабый D — это лишь малая часть истории Rh. Есть еще что обсудить с RhD, например, такие темы, как Partial D и несоответствия в предстоящих БАЙТАХ Ortho Science!

Тони, еще раз спасибо, что нашли время поговорить с нами и поделиться своим опытом.

Надеюсь, вам понравилась дискуссия о слабом тесте D и о том, почему донорам или некоторым пациентам с резус-отрицательной группой крови целесообразно пройти дополнительный подтверждающий тест (слабый тест D) и почему это имеет клиническое значение. Обязательно просмотрите раздел в описании подкаста для материалов для чтения, предложенных в списке литературы.

Теперь, основываясь на нашем сегодняшнем подкасте, я оставляю вас с ортопедической викториной дня: вы помните, сколько существует слабых D-типов? Спасибо, что выслушали сегодня.

Пожалуйста, подпишитесь на Ortho Science BYTES, наш ежемесячный подкаст, где мы будем обсуждать более сложные вопросы, с которыми мы сталкиваемся каждый день в наших лабораториях. Предоставлено вам компанией Ortho Clinical Diagnostics, ведущей достижения в диагностике на протяжении 75 лет, потому что каждый тест — это жизнь.

Берегите себя и берегите себя.

Идентификация ложноположительного теста агглютинации Weak Rh (D) в DAT-положительных эритроцитах

Автор: Решма Намбияр, МББС; Маниш Ратури, MBBS, MD; Анурадха Кусум, MBBS, MD
Категория:  Лабораторная гематология
Дата публикации:  24.08.2020

Краткое описание:

а) Мужчина 55 лет с диагнозом острое заболевание печени [? Аутоиммунная патология] поступил в отделение неотложной помощи нашей больницы с пожелтением мочи и глаз в течение последних трех дней.Он также жаловался на общую слабость и потерю аппетита в течение последних четырех дней. Сопутствующая одышка при физической нагрузке. В анамнезе не было лихорадки, артериальной гипертензии или сахарного диабета.

b) При обследовании количество гемоглобина и тромбоцитов составило 4,6 г/дл и 95000 на мм3 соответственно. Его низкие показатели крови потребовали срочного переливания эритроцитарной массы.

c) Его проба с ЭДТА показала несоответствие группы крови по традиционной методике пробирки [CTT].В то время как его тип клеток показал слабую реакцию смешанного поля (Mf) B Rh (D), его сыворотка показала различные степени агглютинации с подготовленными внутри компании объединенными клетками A, B и O, интерпретируемыми как 4+, 1+ и 1+ соответственно. Его прямая реакция агглютинации [DAT] и аутологичный контроль были положительными. При выдерживании пробирок с его группой сывороток при 37°C в течение часа реакция степени 1+ в объединенных клетках B и O разрешилась. Таким образом, его статус ABO был подтвержден как тип B. Его статус Rh (D) был повторно протестирован с использованием антисыворотки Anti-Rh (D) двух разных производителей, и макроскопически оба показали слабую реакцию в СТТ.

d) Мы проверили его анти-Rh (D) агглютинацию под микроскопом и подтвердили, что это реакция Mf с анти-D [IgM] при 40-кратном увеличении [рис. (a)]. Кроме того, его слабое тестирование D с использованием Anti-D (IgG, разбавленный 1:32) с последующим добавлением реагента против человеческого глобулина показало ложноположительные агглютинаты [FP] [рис. (b)]. Таким образом, точное определение его статуса варианта D не могло быть выполнено серологически из-за его DAT-положительных эритроцитов [которые вызывали агглютинацию FP, что приводило к недействительным результатам].

e) Его группа крови в итоге была интерпретирована как B Rh (D) [Mf? вариант D] со следующими рекомендациями по переливанию крови;

·         Для переливания эритроцитарной массы рассмотрите B или O Rh (D) отрицательные донорские клетки.

f) Слабый Rh (D) фенотип представляет собой ослабленную экспрессию Rh (D) антигена из-за меньшего количества Rh (D) антигенов на эритроцит, чем нормальные Rh (D) положительные эритроциты [1].Поэтому целесообразно рассматривать лиц со слабым антигеном Rh (D) как резус-положительных при представлении в качестве донора и резус-отрицательных по резус-фактору (D) при представлении в качестве реципиента [2].

g) Помимо поддерживающего лечения, пациенту было назначено две дозы наиболее подходящей O Rh (D) отрицательной эритроцитарной массы. Родственники пациента не захотели продолжать лечение и добились его выписки вопреки совету врача. В конечном итоге мы потеряли пациента для дальнейшего наблюдения.

Каталожные номера:

1.Слабый D (Du) фенотип. Доступно по адресу: https://sites.ualberta.ca/~pletendr/tm-modules/rh/70rh-weakd.html   [последний доступ 20.08.2020]

2. Кумар Х., Мишра Д.К., Саркар Р.С., Джайпракаш М. , Трудности в иммуногематологии: слабый D-антиген. Мед J вооруженных сил Индии. 2005 г., октябрь; 61 (4): 348-50.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.