Кровь на микоплазму и хламидии: Респираторные микоплазмы и хламидии

Содержание

Анализ на Антитела к бледной трепонеме (T.pallidum), сум. в лаборатории KDL

Тест направлен на обнаружение антител класса IgM в сыворотке крови человека к возбудителю респираторных инфекций — Chlamydophila pneumoniae. Ранее данный возбудитель назывался хламидия пневмония (Chlamydia pneumoniae). Хламидофила может вызывать острые и длительно текущие (латентные) инфекции у детей школьного возраста и взрослых.

В каких случаях обычно назначают исследование на антитела к хламидофиле

Chlamydophila pneumoniae вызывает нетипичные формы респираторных заболеваний (ОРЗ, бронхит, пневмония) с длительным течением и кашлем. Анализ используют для определения инфекционного агента в остром периоде болезни, но не ранее 7–10 дня от начала заболевания. Анализ на антитела к хламидофиле необходим в случаях длительных заболеваний, при неэффективности стандартной антибиотикотерапии. Выработка антител при хламидийной инфекции может быть замедлена, поэтому во многих случаях при наличии кашля с мокротой целесообразно использовать анализ мокроты на выявление самого возбудителя методом ПЦР — ДНК хламидофил и микоплазм (Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae).

Что именно определяют в процессе анализа

Анализ на антитела к хламидофиле IgM определяет иммуноглобулины класса М в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Что означают результаты теста

Результат выдается в виде КП — коэффициента позитивности.

  • Результат в зоне «не обнаружено» свидетельствует об отсутствии антител к хламидофиле в сыворотке крови.
  • Результат «сомнительный», еще он называется результат в «серой зоне», может говорить о том, что антител еще мало и может потребоваться повторное исследование через 2 недели, чтобы подтвердить инфекцию.
  • Положительный результат говорит о выявлении антител класса IgM, что чаще всего наблюдается в остром периоде инфекции, вызванной хламидофилой.

Обычно анализ на наличие иммуноглобулинов М к хламидофиле сдают одновременно с тестом антитела к хламидофиле (Chlamydophila pneumoniae), IgG (11.15.A6.201).

Обычный срок выполнения теста

Результат теста можно получить в срок до 5–6 дней.

Нужна ли специальная подготовка к анализу

Специальная подготовка не требуется. Подробную информацию можно прочитать в разделе «Подготовка».

Прейскурант на платные услуги | Челябинский областной клинический кожно-венерологический диспансер

1 Исследование на сифилис методом РМП (срок — 1 день) 200
2 Исследование на сифилис методом РИФ (срок — 4 дня) 560
3 Исследование на сифилис методом РПГА (срок — 1 день) 620
4 Исследование на сифилис методом ИФА (суммарные антитела) – (Антитела к возбудителю сифилиса (суммарные) в сыворотке крови) (срок — 2 дня) 340
5 Исследование на антитела класса М к бледной трепонеме (срок — 2 дня) 770
6 Исследование на антитела класса G к Chlamydia trachomatis (срок -1 день) 180
7 Исследование уровня простатспецифического антигена (ПСА) общего (срок — 3 дня) 270
8 Исследование уровня общего тестостерона в крови (срок — 3 дня) 270
9 Исследование уровня лютеинизирующего гормона в сыворотке крови (ЛГ) (срок — 3 дня) 290
10 Исследование уровня пролактина в крови (срок — 3 дня) 270
11 Исследование уровня общего эстрадиола в крови (срок — 3 дня) 680
12 Исследование уровня фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) в сыворотке крови (срок — 3 дня) 290
13 Исследования уровня иммуноглобулина Е (IgE) общего(срок — 4 дня) 360
14 Определение поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) (срок — 3 дня) 200
15 Определение антител к вирусу гепатита С (срок — 3 дня) 320
16 Определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 (срок — 3 дня) 270
17 Определение антител класса G к вирусу простого герпеса (срок — 3 дня) 310
18 Антитела к вирусу краснухи (срок — 3 дня) 264
19 Определение в сыворотке крови антител класса G к описторхисам (качественное определение) (срок — 4 дня) 280
20 Определение в сыворотке крови антител класса G к эхинококкам (качественное определение) (срок — 4 дня) 280
21 Определение в сыворотке крови антител класса G к трихинеллам (качественное определение) (срок — 4 дня) 410
22
Определение в сыворотке крови антител класса G к токсокарам (качественное определение) (срок — 4 дня)
300
23 Определение в сыворотке крови антител класса G к аскаридам (качественное определение) (срок — 4 дня) 300
24 Определение в сыворотке крови суммарных антител к лямблиям (срок — 4 дня) 300
25 Антитела к Toxoplasma gondii IgG (срок — 4 дня) 300
26 Антитела к антигенам гельминтов (описторхисы + эхинококки + токсокары + трихинеллы) в сыворотке крови (срок — 4 дня) 1200
27 Исследование на сифилис методом иммуноблоттинга (подтверждение наличия антител к возбудителю сифилиса) (срок — 5 дней) 1620
28 Определение тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови 1 день 320
29 Определение антител к тиреоидной пероксидазе (ат-ТПО) в сыворотке крови 1 день 420
30 Определение антител к териоглобулину ат-ТГ) в сыворотке крови 1 день 380
31 Определение трийодтиронина свободного (Т3) в сыворотке крови 1 день 340
32 Определение тироксина свободного (Т4) в сыворотке крови 1 день 340
33
Определение кортизола в сыворотке крови 1 день
340
34 Определение антител к одноцепочечной ДНК в сыворотке крови 1 день 580
35 Определение антител к двуцепочечной ДНК в сыворотке крови 1 день 580
36 Исследование на сифилис методом иммуноблоттинга (подтверждение наличия антител к возбудителю сифилиса) 1620
37 Исследование на антитела класса G к бледной трепонеме 2 дня 340

Микоплазма (Mycoplasma hominis) (антитела класса IgА)

 

Mycoplasma hominis принадлежит к классу микоплазм.

Между вирусами, бактериями, простейшими занимает промежуточное положение. Микоплазмы паразитируют на мембранах клеток, рассматриваются как условно-патогенная микрофлора (т.е. в определенных количествах обнаруживаются в составе нормальной микрофлоры слизистых оболочек, в частности мочеполового тракта). При увеличении численности этих микроорганизмов могут развиваться воспалительные процессы мочеполового тракта. Микоплазменные поражения органов урогенитальной системы занимают сегодня ведущее место в группе инфекций, которые передаются половым путем. Нередки сочетания микоплазм с другими микроорганизмами, способными также поражать органы мочеполовой системы, как, например, гонококками, трихомонадами, хламидиями, уреаплазмами.

 

Источник инфекции — больные лица, а также носители инфекции. Инфицирование происходит половым путем. Инфекционный процесс может существовать скрыто, переходя под влиянием различного рода факторов в острую, хроническую, а также рецидивирующую формы.

 

Признаки инфекции разнообразны. Так, у мужчин в большинстве случаев болезнь протекает в форме воспаления мочеиспускательного канала, предстательной железы, сопровождаясь жжением, зудом, болезненностью в области уретры при мочеиспускании и частыми позывами к нему. 

У женщин воспалительный процесс в гениталиях при микоплазменной инфекции выражен слабо и нередко почти не вызывает субъективных ощущений. Однако необходимо отметить, что как моноинфекция микоплазмоз встречается лишь в 12 – 18% случаев, а в ассоциации с другими патогенными микробами – в 70 – 87%, с хламидиями – в 25 – 30% случаев. Продолжительное существование инфекции в организме может приводить к развитию бесплодия, выкидышам, а также к преждевременным родам.

 

Отмечено, что М. hominis выделяется при кольпитах и цервицитах неясной этиологии в 2-4 раза чаще, чем у клинически здоровых женщин. Во многих случаях уреаплазмы вызывают латентную инфекцию, которая под влиянием различных стрессовых факторов может перейти в хроническую рецидивирующую или острую форму.

Инкубационный период длится 3 – 5 нед. Женщины чаще всего являются носителями, а мужчины заражаются половым путем. Многие исследователи предлагают отнести заболевание к венерическим, однако до настоящего времени этот вопрос не решен.

 

Факторами, провоцирующими развитие инфекционного процесса, могут явиться присоединившаяся инфекция различной природы; изменение гормонального фона в связи с фазой менструального цикла; беременность, роды; изменение иммунного статуса организма. Для развития инфекционного процесса большое значение имеет не столько сам факт наличия или отсутствия уреаплазмы, сколько широта и массивность ее диссеминации. Кроме того, до сих пор мало известно о дифференциальной патогенности различных серотипов, их сочетанном воздействии.

 

Проникновение уреаплазм в более глубокие отделы мочевыводящей системы может привести к развитию уретрального синдрома. В 20% случаев уреаплазмы были выделены из мочевых камней при мочекаменной болезни. Описаны случаи острого геморрагического цистита, связанного с микоплазменной инфекцией, с вовлечением верхних и нижних отделов мочеполового тракта, имеются также сообщения о выделении микоплазм у больных с острой абактериальной пиурией. В ряде случаев уретрит, обусловленный Mycoplasma  hominis, может сочетаться с поражением суставов, конъюнктивитом, сопровождаться лихорадкой — «синдром Рейтера». Mycoplasma hominis может передаваться от матери плоду через плаценту, а также в родах. При наличии таких случаев у новорожденных инфицированность этим микроорганизмом может выражаться развитием респираторных инфекций, менингита или же септицемии.

 

Как и при многих инфекциях вообще, при попадании Mycoplasma hominis в организм иммунная система отвечает на нее выработкой специфических иммуноглобулинов различных классов, а именно иммуноглобулинов класса A (IgA), класса M (IgM) и класса G (IgG).

Выработка IgА начинается спустя приблизительно 2-3 недели от момента заражения, антитела циркулируют в крови 2-3 месяца, снижаясь в концентрации и заменяясь высокими концентрациями антител класса G в случае выздоровления. При обострении хронического процесса вновь появляются в крови, являясь маркерами реактивации инфекции наряду с обнаружением ДНК в урогенитальных соскобах. Концентрация IgA пропорциональна выраженности воспалительного процесса.

 

Показания к назначению:

  • диагностика, определение стадии инфекции, вызванной Mycoplasma hominis;
  • дифференциальная диагностика инфекций, вызывающих воспалительные процессы органов урогенитального тракта и репродуктивной системы;
  • планирование беременности;
  • обследование женщин во время беременности при наличии жалоб;
  • осложненная беременность, прерывание беременности;
  • оценка эффективности терапии.

Референсные значения: Отрицательный результат.

Необходимо воздержаться от приема пищи в течение 2-3 часов.

Наименование анализа

Время приема
в субботу

Примечания

Клинический анализ крови

09.00-11.30

Натощак

Биохимический анализ крови

09. 00-11.30

Натощак

Кровь на аллергены (ИФА метод)

09.00-11.30

 

Кровь на гормоны (ИФА метод)

09. 00-11.30

Натощак

Кровь на антитела к паразитам

09.00-11.30

 

Определение антител класса М к вирусному гепатиту А в крови

09. 00-11.30

Определение антигена вирусного гепатита В в крови

Определение антител к вирусу гепатита В (анти-HbS) и С (IgM, IgG) в крови

Определение антител к вирусу простого герпеса, цитомегаловирусу, вирусу Эпштейна-Барра, краснухи, микоплазме пневмонии, хламидии пневмонии, токсоплазме в крови

Определение антител к вирусу иммунодефицита человека ВИЧ-1, ВИЧ -2 в крови

Комплексное исследование на антитела к Treponema pallidum в крови

Определение антител класса G к вирусу кори  в крови

Общий анализ мочи

09. 00-11.30

Копрограмма, соскоб на э/биоз, кал на я/глистов

09.00-11.30

Иммуноцитохимическое исследование мазков (простой герпес, микоплазма, хламидии, цитомегаловирус, Эпштейна-Барра)

09. 00-11.30

Иммуногистохимическое исследование на коклюш, парвовирус В19

Риноцитограмма

Иммуногистохимическое исследование (кал на лямблии, геликобактер пилори, энтеровирус, ротавирус)

09. 00-11.30

Бак исследование мазков из зева (носа) на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы с антибиотикограммой

09.00-11.30

Натощак

Анализы на ИППП в СПб в медицинском центре «На Сенной» ,доступные цены.

Диагностика ИППП или ЗППП

Через несколько недель после полового контакта без использования презерватива с новым знакомым следует сдать анализы на ИППП:

  • Мазок на флору. Это исследование позволит выявить такие инфекции как гонорея, трихомонады, гарднереллу, кандиды.
  • Посев выделений. Метод позволяет определить не только возбудителя, но и чувствительность к антибиотикам.
  • ПЦР-диагностика на уреаплазму и микоплазму все типы, хламидии, вирус папилломы человека, герпес, трихомонады, гонорею. Метод высокоинформативный и позволяет выявить инфекции в 99% случаев.
  • Анализ крови (ВИЧ, гепатиты В и С)
  • ИФА –метод

Когда нужно сдавать анализы на скрытые инфекции?

После незащищенного полового акта с человеком в котором вы не совсем уверены. В этом случае следует незамедлительно обратиться к врачу гинекологу или урологу для проведения медикаментозных мер профилактики ЗППП. Через несколько недель необходимо сдать анализы на инфекции. Инкубационный (скрытый) период у большинства половых инфекций составляет 3-4 недели, поэтому в это время выявить заболевания не получится.

При планировании и во время беременности. ЗППП и TORCH инфекции могут стать причиной выкидыша, а также передаться ребенку, обследование и лечение рекомендовано проводить до наступления беременности.

При наличии симптомов: обильные выделения из половых путей, зуд, жжение, высыпания на интимных органах, боли и дискомфорт в низу живота.

Профилактически при отсутствии смены половых партнеров анализы следует сдавать не реже одного раза в год.

Как подготовиться к исследованию?

За две недели до сдачи анализов прекратить прием антибиотиков.

Накануне проведения исследования рекомендуется употреблять алкогольные напитки, острую, соленую пищу. Это так называемая « алиментарная (пищевая) провокация» способствуют лучшему выявлению инфекции.

За сутки до исследования исключить половые контакты и мужчинам, и женщинам.

Мужчинам за 2 часа до сдачи мазков не мочиться.

Женщинам накануне не спринцеваться, не использовать свечи, мази, спермициды.

Где сдать анализы на ИППП или ЗППП в СПб?

В медицинском центре «На Сенной» вы можете сдать анализы в одном месте и на весь широкий спектр возбудителей.

Вы можете пройти обследование анонимно, мы уважаем ваше решение и выбор. В медицинском центре “На Сенной” для удобства подготовили комплексы исследований, которые включают в себя оптимальный перечень анализов для выявления самых распространённых ИППП и по доступным ценам. Записаться можно по указанным контактным телефонам или через форму записи на прием.

Сдать анализ: Хламидия (Chlamidophila psitaci, pneumonia), антитела IgG

Описание анализа:

Хламидия (Chlamydophila pneumoniae), IgG – тест, применяемый для проверки на антитела, характерные для респираторного хламидиоза. Иммуноглобулины G – один из классов антител, вырабатываемых организмом, в ответ на заражение хламидией. Они определяются в крови спустя несколько недель после инфицирования и могут циркулировать в организме до двух лет.

Этот анализ в комплексе с анализом на антитела IgM и ПЦР-диагностикой позволяет довольно точно установить сроки заражения и стадию хламидийной инфекции.

Chlamydophila pneumoniae – бактерия, поражающая дыхательные пути и способная спровоцировать развитие ларингита, фарингита, синусита, отита, бронхита и пневмонии. Чаще всего наблюдается у детей и людей пожилого возраста. Изучается вероятность того, что при респираторном хламидиозе создаются благоприятные условия для развития бронхиальной астмы, саркоидоза, атеросклероза и болезни Альцгеймера.

Chlamydophila pneumoniae передается пациентами с симптомами респираторного хламидиоза либо же бессимптомными носителями бактерии. Точных данных о длительности инкубационного периода нет – в некоторых случаях болезнь проявляется месяцы спустя после заражения. Это объясняется тем, что хламидия может длительное время сохранять жизнеспособность на слизистых оболочках верхних дыхательных путей.

Воспаление легких, спровоцированное респираторным хламидиозом, относится к разряду атипичных пневмоний, и не имеет специфических симптомов. Общее течение болезни схоже с воспалением легких, спровоцированным микоплазмой, различить их возможно только методами лабораторной диагностики. Потому часто врачами назначается одновременное исследование сразу на микоплазменную и хламидийную инфекции.

Показания к назначению

На обследование направляет терапевт, педиатр, ЛОР, пульмонолог или инфекционист при наличии следующих показаний:

  • пневмония с нетипичным течением;
  • симптомы респираторных инфекций, возможным возбудителем которых может быть Chlamydophila pneumoniae.

Интерпретация результатов

Результаты исследования визуализируются в виде числового индекса, чем выше значение которого – тем выше вероятность присутствия возбудителя. Если значение менее 0,9, значит анализ отрицательный – антител IgG к Chlamydophila pneumoniae не обнаружено. Это возможно в нескольких случаях: если пациент здоров, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени для начала синтеза этого класса антител, либо же если с момента заражения прошло более 2-х лет.

Результат от 0,9 до 1,09 является сомнительным и требует проведения повторного теста. Значение индекса, равное или превышающее 1,1 указывает на положительный результат – у пациента протекает болезнь, спровоцированная Chlamydophila pneumoniae, либо же была в недалеком прошлом (до 2-х лет).

Подготовка к исследованию: не нужна.

Материал для исследования: кровь из вены.

Метод исследования: иммуноферментный анализ.

Срок проведения: 3 рабочих дня.

Лабораторно-диагностическое отделение | Клиника им. В.П. Аваева

Спектр видов анализов, выполняемых в Централизованной лаборатории, достаточно обширен:

• Общеклинические анализы крови: 14 параметров показателей крови, определение СОЭ, подсчет ретикулоцитов, обнаружение клеток красной волчанки, лизис лейкоцитов, определение свертываемости крови, определение времени кровотечения, обнаружение малярийного плазмодия.

• Общеклинические анализы мочи, определение суточного белка в моче, микроскопия осадка мочи по Нечипоренко, проба Зимницкого.

• Исследование спинно-мозговой жидкости.

• Копрологические исследования: копрограмма, обнаружение цист простейших, яиц глист и соскоб на энтеробиоз.

• Бактериоскопические исследования на гонорею, трихомониаз, кандидоз, лептотрихоз, дисбиоз влагалища, хламидиоз, степень чистоты влагалища.

• Цитологические исследования на атипические клетки. Обнаружение клеток Тцанка и эозинофилии в мазке-отпечатке.

• Исследование на возбудителя сифилиса.

• Исследование сока простаты.

• Спермограмма.

• ПЦР-исследования на: хламидии, уреаплазмы, микоплазмы, трихомонады, гонорею, кандидоз, цитомегаловирус, вирус папилломы человека, герпес, гепатиты В и С, ВИЧ.

• ПИФ-диагностика хламидиоза.

• Широкий спектр биохимических исследований, в том числе капиллярная глюкоза, суточные колебания глюкозы в крови.

• Микологические исследования: микроскопия и культуральные исследования грибов.

• Микроскопическое исследование на Demodex, чесоточный клещ.

• Трихограмма (определение фаз роста волос).

• Иммунологические исследования: определение показателей клеточного иммунитета (НСТ-тест, фагоцитоз, иммуноглобулины М, G,А) и функциональной активности Т- и В-лимфоцитов с использованием моноклональных антител.

• Аллерготесты на пищевые и респираторные аллергены.

• Определение группы крови и резус-фактора.

• Экспресс-диагностика (результат в течение 1 часа): на сифилис; ВИЧ, гепатиты В и С.

• Иммуноферментный анализ (ИФА): диагностика сифилиса, гепатиты В и С, ВИЧ, лямблиоз, цитомегаловирус, токсоплазмоз, токсокароз, хламидиоз, герпес.

• Гормональное зеркало (половые гормоны, гормоны щитовидной железы, АФП и ХГЧ – маркеры аномалии беременности).

• РПГА на сифилис и брюшной тиф.

• РИФ на сифилис.

• Жидкостная цитология.

хламидиальные, микоплазмы, и уреаплазматические слизистые инфекции слизистой оболочки — инфекционные заболевания

    • оральные антибиотики (предпочтительно азитромицин)

    • эмпирическое лечение для гонореи, если он не был исключен

    • Лечение сексуальных партнеров

    Неосложненные документированные

    • Однократная доза азитромицина 1 г перорально

    • Доксициклин 100 мг перорально 2 раза в день в течение 7 дней

      Эритромицин

      основание 500 мг перорально или в виде этилсукцината 800 мг 4 раза в день в течение 7 дней

    • Офлоксацин 300 мг внутрь 2 раза в день в течение 7 дней

    • женщинам следует применять азитромицин 1 г перорально однократно.

      Эти схемы не обеспечивают надежного лечения гонореи, которая сосуществует у многих пациентов с хламидийными инфекциями. Таким образом, лечение должно включать однократную дозу цефтриаксона 250 мг в/м, если не исключена гонорея.

      Пациенты с рецидивом (около 10%) обычно коинфицированы микробами, которые не реагируют на антихламидийную терапию, или они повторно инфицированы после лечения.

      Необходимо повторное обследование на хламидийную инфекцию и гонорею и, по возможности, на трихомониаз.Их следует лечить азитромицином, если они не получали его ранее. Если азитромицин оказался неэффективным, следует попробовать моксифлоксацин (активный в отношении устойчивых к азитромицину видов Mycoplasma или Ureaplasma ). В регионах, где преобладает трихомониаз, рекомендуется эмпирическое лечение метронидазолом, если тест полимеразной цепной реакции (ПЦР) не показывает, что пациенты не имеют трихомониаза.

      Нынешних половых партнеров следует лечить. Пациенты должны воздерживаться от половых контактов до тех пор, пока они и их партнеры не пройдут лечение в течение ≥ 1 недели.

      Если хламидийные генитальные инфекции не лечить, симптомы и признаки исчезают в течение 4 недель примерно у двух третей пациентов. Однако у женщин бессимптомная инфекция шейки матки может сохраняться, приводя к хроническому эндометриту, сальпингиту или тазовому перитониту и их последствиям — тазовым болям, бесплодию и повышенному риску внематочной беременности. Поскольку хламидийные инфекции могут иметь серьезные долгосрочные последствия для женщин, даже если симптомы слабо выражены или отсутствуют, крайне важно выявлять инфекцию у женщин и лечить их и их половых партнеров.

      • 1. Kong FYS, Tabrizi SN, Fairley CK, et al: Эффективность азитромицина и доксициклина для лечения ректальной хламидийной инфекции: систематический обзор и метаанализ. J Antimicrob Chemother 70: 1290–1297, 2015. doi: 10.1093/jac/dku574

      Диагностика и лечение уретрита у мужчин

      1. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Заболевания, передающиеся половым путем, в США, 2008 г. Данные национального эпиднадзора за хламидиозом, гонореей и сифилисом.http://www.cdc.gov/std/stats08/trends.htm. По состоянию на 18 января 2010 г. ….

      2. Miller WC, Форд Калифорния, Моррис М, и другие. Распространенность хламидийной и гонококковой инфекций среди молодых людей в США. ЯМА . 2004;291(18):2229–2236.

      3. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Бесплодие и ЗППП. http://www.cdc.gov/std/infertility/default.htm. По состоянию на 18 января 2010 г.

      4. Кит А. Экстрагенитальная инфекция Chlamydia trachomatis как реактивный артрит, приобретенный половым путем. J Заразить . 1992; (25 приложение 1): 47–49.

      5. Трей Дж. С., Канас ЛК, Гулд пл. Осложнения репродуктивного тракта, связанные с инфекцией Chlamydia trachomatis, у мужчин ВВС США в течение 4 лет после тестирования. Секс Трансм Дис . 2008;35(9):827–833.

      6. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Надзор за заболеваниями, передающимися половым путем, 2008 г. Таблица 13. Гонорея — зарегистрированные случаи и показатели по штатам/районам и регионам, перечисленные в алфавитном порядке: США и отдаленные районы, 2004–2008 гг.http://www.cdc.gov/std/stats08/tables/13.htm. По состоянию на 18 января 2010 г.

      7. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Эпиднадзор за заболеваниями, передающимися половым путем, 2008 г. Таблица 21b. Гонорея — показатели на 100 000 населения по расе/этнической принадлежности, возрастной группе и полу: США, 2004–2008 гг. http://www.cdc.gov/std/stats08/tables/21b.htm. По состоянию на 18 января 2010 г.

      8. Тоттен, Пенсильвания, Шварц М.А., Шёстрём К.Е., и другие. Ассоциация Mycoplasma genitalium с негонококковым уретритом у гетеросексуальных мужчин [опубликованное исправление появляется в J Infect Dis.2003;187(9):1506]. J Заразить Dis . 2001;183(2):269–276.

      9. Гамбини Д, Деклева И, Лупика Л, Гисланзони М, Кузини М, Алесси Э. Mycoplasma genitalium у мужчин с негонококковым уретритом: распространенность и клиническая эффективность эрадикации. Секс Трансм Дис . 2000;27(4):226–229.

      10. Мой Х, Рейнтон Н, Могаддам А. Mycoplasma genitalium ассоциирована с симптоматическими и бессимптомными негонококковыми уретритами у мужчин. Заражение сексом . 2009;85(1):15–18.

      11. Короткая ВЛ, Тоттен Пенсильвания, Несс РБ, Астете С.Г., Келси С.Ф., Хаггерти CL. Клиническая картина инфекции Mycoplasma genitalium по сравнению с инфекцией Neisseria gonorrhoeae у женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза. Клин Заражение Дис . 2009;48(1):41–47.

      12. Эдберг А., Юрстранд М, Йоханссон Э, и другие. Сравнительное исследование трех различных ПЦР-анализов для обнаружения Mycoplasma genitalium в урогенитальных образцах мужчин и женщин. J Med Microbiol . 2008; 57 (часть 3): 304–309.

      13. Йошида Т., Дегучи Т, Меда С, и другие. Количественное определение Urea-plasma parvum (биовар 1) и Ureaplasma urealyticum (биовар 2) в образцах мочи мужчин с уретритом и без него методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Секс Трансм Дис . 2007;34(6):416–419.

      14. Швебке Дж.Р., Крюк РЭБ III. Высокий уровень Trichomonas vaginalis среди мужчин, посещающих клинику заболеваний, передающихся половым путем: значение для скрининга и лечения уретрита. J Заразить Dis . 2003;188(3):465–468.

      15. Брэдшоу К.С., Табризи С.Н., читайте ТЗ, и другие. Этиология негонококкового уретрита: бактерии, вирусы и связь с орогенитальным воздействием. J Заразить Dis . 2006;193(3):336–345.

      16. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Рекомендации по лечению венерических заболеваний 2006 г.: заболевания, характеризующиеся уретритом и цервицитом. http://www.cdc.gov/STD/treatment/2006/urethritis-and-cervicitis.htm. По состоянию на 30 июня 2009 г.

      17. Леунг А., Тейлор С, Смит А, Спендер Р, Хорнер П. Инфекции мочевыводящих путей у больных острым негонококковым уретритом. Int J STD AIDS . 2002;13(12):801–804.

      18. Шахманеш М, Мой Х, Лассау Ф, Жаньер М, для ИУСТИ/ВОЗ. Европейское руководство 2009 г. по лечению негонококкового уретрита у мужчин. Int J STD AIDS . 2009;20(7):458–464.

      19. Маэда С., Ясуда М, Ито С, Сейке К, Ито С, Дегучи Т. Лечение азитромицином негонококкового уретрита, отрицательного на Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum. Int J Urol . 2009;16(2):215–216.

      20. Джернберг Э., Могаддам А, Мой Х. Азитромицин и моксифлоксацин для микробиологического лечения инфекции Mycoplasma genitalium: открытое исследование. Int J STD AIDS . 2008;19(10):676–679.

      21. Дженсен Дж. С., Брэдшоу К.С., Табризи С.Н., Фэрли СК, Хамасуна Р. Неэффективность лечения азитромицином у пациентов с негонококковым уретритом, положительным на Mycoplasma genitalium, связана с индуцированной резистентностью к макролидам. Клин Заражение Дис . 2008;47(12):1546–1553.

      22. Террис М.К., Черукури С.В., Хэтэуэй, Калифорния. Уретральный синдром. http://emedicine.medscape.com/article/451683-обзор.По состоянию на 18 января 2010 г.

      23. Сеть по интерстициальному циститу. Специальный отчет INC: ДИЕТА. Понимание диеты и IC. http://www.ic-network.com/handbook/diet.html. По состоянию на 30 июня 2009 г.

      24. Хогбен М., Святой Лаврентий Дж.С., Монтаньо, DE, Каспшик Д, Лейхлитер Дж.С., Филипс ВР. Мнения врачей о методах уведомления партнеров: отчеты о случаях, направление пациента и направление поставщика. Заражение сексом . 2004;80(1):30–34.

      25. Левин Д, Вудрафф Эй Джей, Мочелло АР, Лебрия Дж, Клаузнер Дж.Д. inSPOT: первая онлайн-система уведомления партнеров по ЗППП с использованием электронных открыток. ПЛОС Мед . 2008;5(10):e213.

      26. Центры по контролю и профилактике заболеваний Ускоренная партнерская терапия при лечении заболеваний, передающихся половым путем Атланта, Джорджия: Министерство здравоохранения и социальных служб США; 2006 г. http://www.cdc.gov/std/Treatment/EPTFinalReport2006.пдф. По состоянию на 16 декабря 2009 г.

      27. Киссинджер П., Мохаммед Х, Ричардсон-Алстон Г., и другие. Партнерское лечение мужского уретрита: рандомизированное контролируемое исследование. Клин Заражение Дис . 2005;41(5):623–629.

      28. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Правовой статус ускоренной партнерской терапии (ЭПТ). http://www.cdc.gov/std/EPT/legal/default.htm. По состоянию на 15 февраля 2010 г.

      29. Мейерс Д.С., Халворсон Х, Лукхаупт С, для У.S. Целевая группа профилактических услуг. Скрининг на хламидийную инфекцию: обновление фактических данных для Целевой группы профилактических служб США. Энн Интерн Мед . 2007;147(2):135–142.

      30. Целевая группа профилактических служб США. Скрининг на гонорею: формулировка рекомендаций. Энн Фам Мед. 2005;3(3):263–267. http://www.ahrq.gov/clinic/uspstf05/gonorrhea/gonrs.htm. По состоянию на 16 декабря 2009 г.

      31. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Руководство по лечению заболеваний, передающихся половым путем, 2006 г.Особые группы населения: МСМ. http://www.cdc.gov/std/treatment/2006/specialpops.htm#specialpops4. По состоянию на 18 января 2010 г.

      32. Садик С.Т., Тейлор С, Копас Эй Джей, и другие. Влияние уретрита на нагрузку РНК ВИЧ-1 в семенной плазме у гомосексуальных мужчин, не получающих антиретровирусную терапию. Заражение сексом . 2005;81(2):120–123.

      33. Коэн М.С., Хоффман ИФ, Ройс Р.А., и другие., для Исследовательской группы AIDSCAP Малави.Снижение концентрации ВИЧ-1 в сперме после лечения уретрита: последствия для профилактики передачи ВИЧ-1 половым путем. Ланцет . 1997;349(9069):1868–1873.

      Частота инфекций Clamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae у детей | Журнал тропической педиатрии

      Аннотация

      Цель: Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae являются одними из наиболее важных возбудителей острых респираторных инфекций у детей в возрасте от 5 до 15 лет. Мы стремились исследовать сезонную частоту респираторных инфекций, вызванных C. pneumoniae и M. pneumoniae , частоту коинфекции, клинические данные и определить взаимосвязь между клиническими данными и результатами лабораторных исследований.

      Материалы и методы: Всего в исследование было включено 284 пациента (в возрасте от 5 до 15 лет), поступивших в поликлинику с симптомами инфекций дыхательных путей в период с января 2004 г. по июнь 2005 г.Антитела IgA, IgG и IgM против C. pneumoniae были количественно обнаружены во всех образцах сыворотки с помощью микроиммунофлуоресценции (МИФ). Для инфекции M. pneumoniae анализировали титр IgM в тесте ELISA. Образцы мазка из носоглотки были взяты для обнаружения методом ПЦР.

      Результаты: Средний возраст составил 8 ± 2,2 (диапазон 5–14) лет. Mycoplasma pneumoniae IgM в 86 (30,2%) случаях, C. pneumoniae IgM в одном (0,3%) случае, IgA в шести (2. 1%) и IgG в 10 (3,5%) случаях. В 10 (3,5%) случаях одновременно были обнаружены как C. pneumoniae IgG (титр >1/216), так и M. pneumoniae IgM. M. pneumoniae IgM зимой было обнаружено значительно выше по сравнению с другими сезонами. Mycoplasma pneumoniae Методом ПЦР было проведено в общей сложности 203 образца, в 33 (16,2%) из которых M. pneumoniae оказались положительными. Доля ложноположительных результатов метода ПЦР составила 16.2%. Всего из 217 исследованных образцов методом ПЦР ДНК C. pneumoniae оказалась положительной у двух пациентов.

      Заключение: Mycoplasma pneumoniae была частым возбудителем респираторных инфекций. В противном случае инфекции C. pneumoniae редко наблюдались у детей. Сравнение серологических диагностических тестов для инфекций, вызванных M. pneumoniae , оказалось более чувствительным и специфичным, чем ПЦР.

      Введение

      Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae являются частыми возбудителями острых респираторных инфекций у детей. Хотя обычно наблюдаются инфекции нижних дыхательных путей, такие как пневмония и бронхит, эти микроорганизмы также могут вызывать фарингит, синусит и острый средний отит [1, 2]. Сообщается, что инфекции Mycoplasma pneumoniae составляют 70% всех случаев в возрасте 9–15 лет [3, 4]. 20% детей, инфицированных C. pneumoniae , также инфицированы сопутствующей инфекцией M. pneumoniae . Однако эти исследования в основном отражают частоту госпитализации пациентов.Поскольку мы рассматриваем сообщество в целом, эти микроорганизмы вызывают инфекции в основном у амбулаторной группы пациентов.

      Физикальные признаки неспецифичны, поэтому в случаях стойкого кашля, продолжающегося более 2 недель и резистентного к обычной антибиотикотерапии, клиницисты ставят диагноз, рассматривая эти два микроорганизма [5]. В результате эффективная антибактериальная терапия обычно начинается с опозданием на 2–3 недели. Оба микроорганизма могут быть выделены из культур, однако это сложный метод, и предпочтение отдается серологическим диагностическим тестам или обнаружению последовательностей нуклеиновых кислот и ДНК [6, 7].

      Целью данного исследования является определение сезонной частоты инфекций C. pneumoniae и M. pneumoniae у амбулаторных пациентов с острой респираторной инфекцией. Мы также стремились изучить наиболее частые клинические проявления, связанные с этими патогенами, найти быстрые, чувствительные, дешевые и надежные методы диагностики, которые могут помочь клиницистам в ранней диагностике и установлении взаимосвязи между клиническими данными и результатами лабораторных исследований среди пациентов, поступивших в нашу клинику. амбулаторное отделение.Ранняя диагностика этих инфекций приведет к более раннему началу соответствующей антибактериальной терапии и предотвращению использования ненужных антибиотиков.

      Материалы и методы

      Дизайн исследования

      Всего в исследование было включено 284 пациента (в возрасте от 5 до 15 лет) с симптомами респираторных инфекций. Среди всех случаев 107 пациентов были госпитализированы в период с января по июнь 2004 г., 90 были госпитализированы в период с июня по декабрь 2004 г. и 87 были госпитализированы в период с декабря 2004 г. по июнь 2005 г.Были зарегистрированы демографические характеристики пациентов. Местный комитет по этике одобрил исследование.

      Критерии приемлемости

      Исследуемую популяцию составили пациенты с охриплостью голоса, хрипами, болью в груди и клиническими симптомами легочной инфекции (бронхит, пневмония). Включенные пациенты должны были не получать антибиотики в течение последних 72 часов и не иметь диагноза хронических заболеваний, таких как иммунодефицит, злокачественные заболевания и туберкулез.

      Пациенты, поступившие с ранее указанными симптомами, прошли первоначальную оценку, которая включала общий анализ крови, С-реактивный белок (СРБ), скорость оседания эритроцитов и рентгенографию грудной клетки (особенно у пациентов с симптомами инфекции нижних дыхательных путей), которые подтвердили Клинические результаты. При первом поступлении также были взяты образцы крови и мазка из носоглотки, которые сразу же были доставлены в микробиологическую лабораторию.

      Серология C.пневмонии

      Наличие специфических антител (IgG, IgM, IgA) к C. pneumoniae было количественно определено методом MİF, в котором использовались наборы C. pneumoniae IgM, IgG и IgA. Процедура метода микроиммунофлуоресценции (МИФ) планировалась с учетом процедуры применения наборов. В остром периоде адекватной реакцией для постановки диагноза острой инфекции считали положительный единичный титр IgM более 1/16 и титр IgG более 1/512 или 4-кратное увеличение титра IgG [8].

      Серология M. pneumoniae

      Специфические антитела IgM и IgG против M. pneumoniae исследовали в образцах сыворотки больных. Для предотвращения ложноположительных реакций при диагностике специфических IgM-антител вместо имеющихся покрытых антигеном микропластинок использовали ИФА-тест «IgM-захват» и наборы Platelia M. pneumoniae IgM [9]. Для острых инфекций M. pneumoniae диагноз ставили, демонстрируя прирост титра IgM более чем 1/10 и 4-кратное увеличение титра IgG с помощью ELISA.

      Обнаружение C. pneumoniae методом ПЦР в образце мазка из носоглотки

      Образцы мазка из носоглотки собирали тонкими тампонами с дакроновыми наконечниками и металлическими ручками и помещали в транспортную среду. Образцы, которые не могли быть исследованы сразу, хранились при -70°С и наблюдались в ультрафиолетовом (УФ) свете после процесса экстракции [8, 10].

      Обнаружение M. pneumoniae методом ПЦР в образце мазка из носоглотки

      Образцы мазка из носоглотки были собраны с помощью тампона-аппликатора Dacron.Мазки помещали в пробирки, содержащие 3 мл транспортной среды для микоплазм. Затем пробирки с образцами транспортировали на льду в лабораторию в тот же день сбора и хранили при температуре -70°C до обработки для проведения ПЦР.

      Статистический анализ

      Классификационные данные были проанализированы с помощью критерия χ 2 и точного критерия Фишера. Непрерывные переменные, такие как число лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов в первый час (СОЭ-1), сравнивали с использованием независимого критерия Стьюдента t .Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS для Windows. Статистическая значимость определяется как P < 0,05.

      Результаты

      Среди всех случаев 139 (48,9%) женщин и 145 (51,1%) мужчин, возраст пациентов составлял 8 ± 2,2 (от 5 до 14) лет. В 64,1% случаев курил один из родителей, в 15,8% случаев оба родителя. Из всех случаев у 204 были симптомы кашля, у 86 — лихорадка и у 29 — ринит. При физикальном обследовании хрипы выслушивались в билатеральных легочных полях в 174 случаях (табл. 1) 52.У 8% ( n = 150) всех пациентов была диагностирована инфекция нижних дыхательных путей, а у 47,2% ( n = 134) пациентов была диагностирована инфекция верхних дыхательных путей. Все пациенты с диагнозом инфекции нижних дыхательных путей также были оценены как имеющие атипичную пневмонию. Из случаев инфекции верхних дыхательных путей у 85 (63,4%) был диагностирован фарингит и у 49 (36,6%) — синусит. Из числа заболевших 53,9% заболевших были включены в исследование зимой 14 лет.1% заболевших весной и 13,7% заболевших летом (табл. 1).

      Таблица 1

      Распределение случаев курения статус, симптомы и признаки

      . Количество ящиков нет . % .
      Курильщик в доме    
          Мать или отец 181
      Мать и отца 45 15.8
      231 81.3 81.3
      Plave (Огонь / Уголь) 53 18. 7 18.7
      86 30,3
      Cough 204 71.8
      ринита 29 10,2
      легочные хрипы 174 61,3
      Времена года
      Spring 40 14,1
      Летние 39 13.7 13.7
      падение 52 52 18.3 18.3
      Зима 160 53.9 
      . Количество ящиков нет . % .
      Курильщик в доме
      Матери или отца 182 64,1
      Мать и отец 45 15,8
      Система отопления дома  
          Природный газ/радиатор 231  81. 3
      Печь (дрова / уголь) 53 18,7
      Симптомы
      Лихорадка 86 30,3
      Кашель 204 71,8
      Насморк 29 10,2
      Легочные хрипы 174 61,3
      Времена года
      Пружина 40 14.1
      Лето 39 13,7
      Падение 52 18,3
      Winter 160 53,9
      Таблица 1

      Распределение случаев курения состояния, симптомы и знаки

      . Количество ящиков нет . % .
      Курильщик в доме
      1
      Мать и отца 45 15. 8
      231 81.3 81.3
      Plave (Огонь / Уголь) 53 18.7 18.7
      86 30,3
      Cough 204 71.8
      ринита 29 10,2
      легочные хрипы 174 61,3
      Времена года
      Spring 40 14,1
      Летние 39 13.7 13.7
      падение 52 52 18.3 18.3
      Зима 160 53.9 
      . Количество ящиков нет . % .
      Курильщик в доме
      Матери или отца 182 64,1
      Мать и отец 45 15,8
      Система отопления дома  
          Природный газ/радиатор 231  81.3
      Печь (дрова / уголь) 53 18,7
      Симптомы
      Лихорадка 86 30,3
      Кашель 204 71,8
      Насморк 29 10,2
      Легочные хрипы 174 61,3
      Времена года
      Пружина 40 14.1
      лето 39 39 13.7
      52 18. 3
      зима 160 53.9 53.9

      Серологические результаты

      Антитела IgM и IgG против M. pneumoniae и антитела IgA, IgM и IgG против C. pneumoniae были оценены у 284 пациентов, включенных в исследование. Из-за материального дефицита и транспортных проблем из этих больных М.pneumoniae у 227 пациентов и C. pneumoniae у 217 пациентов были проанализированы методом ПЦР.

      M. pneumoniae IgM в 86 (30,2%) случаях, C. pneumoniae IgM в одном (0,3%) случае, IgA в шести (2,1%) случаях и IgG в 10 (3,5%) случаях оказались положительными . В 10 (3,5%) случаях одновременно были обнаружены как C. pneumoniae IgG (титр >1/216), так и M. pneumoniae IgM. В 70 из всех случаев (24,6%) M. pneumoniae IgG также оказались положительными (табл. 2).

      Таблица 2

      Распределение серологических результатов случаев

      3,5 пневмонии
      Серология . п . % .
      М. Пневмококк IgM 86 30,2
      М. пневмонии IgG 70 24,6
      С. пневмонии IgG 1 0 .3
      С. Пневмококк IgM 10
      С. пневмонии IgA 6 2.1
      С. пневмонии IgG и М. 10  3,5 
      Серология . п . % .
      М.Пневмококк IgM 86 30,2
      М. пневмонии IgG 70 24,6
      С. пневмонии IgG 1 0.3
      С. пневмонии Igm 10 10 3 3
      C. pneumoniae IgA 6 21 29
      C. Pneumoniae IgG и М.pneumoniae   10  3,5 
      . п . % . M. pneumoniae IgM 86 86 30.2 30.2 M. pneumoniae IgG 70 24.6 С. пневмонии IgG 1 0.3 С. Pneumoniae IgM 10 3,5 С. пневмонии IgA 6 2.1 C. pneumoniae IgG и M. pneumoniae 10 3,5 3 90 .
      п . % .
      М. Пневмококк IgM 86 30,2
      М. пневмонии IgG 70 24,6
      С. пневмонии IgG 1 0.3
      C. Pneumoniae IgM 10 3 35 3514 C. Pneumoniae IGA 6 21
      C. Pneumoniae IgG и M. pneumoniae 10 3.5

      По данным возрастной группы, M. Pneumoniae IgM было найдено положительным в 62 (72,1%) случаев в возрасте от 5 до 9 лет с наибольшей частотой, и C. pneumoniae IgG также был положительным в семи случаях в возрасте от 5 до 9 лет с наибольшей частотой (таблица 3). Статистически значимой разницы между возрастными группами и серологическими результатами при проведении анализов критерия хи-квадрат и точного теста Фишера обнаружено не было.

      Таблица 3

      Распределение серологических результатов по возрастным группам и сезонам года

      5-9 62
      Возраст (лет) . M. pneumoniae IgM-положительный . M. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgA-положительный . М.pneumoniae IgM и C. pneumoniae IgG-положительные . M. pneumoniae ПЦР-положительный .
      . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % .
      72,1 50 71,4 7 70 4 66,6 7 70 26 78,8
      10 –14 24 27.9 20 28,6 3 30 2 33,4 3 30 7 21,2
      Итого 86 100 70 100 10 100 100 6 100 10 100 100 3 9 100
      Весна 24 28 P 20 28.6 р 4 40 2 33,3
      лето 5 5,8 8,01 / 0,046 6 8,6 3,77 / 0,15 1 10 0
      10 11. 6 7 10 1 10 2 33.3
      зима 47 54,6 37 52,8 4 40 2 33,3
      8 Итого
      Возраст (лет) . M. pneumoniae IgM-положительный . M. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgA-положительный . M. pneumoniae IgM и C. pneumoniae IgG-положительные . M. pneumoniae ПЦР-положительный .
      . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % .
      5-9 62 72.1 72,1 71.4 7 914 7 70 4 66,6 7 70 26 78.
      10-14 24 27,9 20 28,6 3 30 2 33,4 3 30 7 21,2
      86 100 70 100 10 100 6 100 10 100 33 100
      Пружина 24 28 р 20  28. 6 р 4 40 2 33,3
      лето 5 5,8 8,01 / 0,046 6 8,6 3,77 / 0,15 1 10 0
      10 11.6 7 10 1 10 2 33.3
      зима 47 54,6 37 52,8 4 40 2 33,3
      Таблица 3

      Распределение серологических результатов по возрастным группам и сезонам года

      Возраст (лет) . M. pneumoniae IgM-положительный . M. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgA-положительный . M. pneumoniae IgM и C. pneumoniae IgG-положительные . M. pneumoniae ПЦР-положительный .
      . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % .
      5–9 62 72. 1 50 71,4 7 70 4 66,6 7 70 26 78,8
      10-14 24 27,9 20 28,6 3 30 2 33,4 3 30 7 21,2
      Итого 86 100 70 100 10 100 6 100 10 100 100 3 9 100 100
      Весна 24 28 P 20 28. 6 р 4 40 2 33,3
      лето 5 5,8 8,01 / 0,046 6 8,6 3,77 / 0,15 1 10 0
      10 11.6 7 10 1 10 2 33.3
      зима 47 54,6 37 52,8 4 40 2 33,3
      8 Итого
      Возраст (лет) . M. pneumoniae IgM-положительный . M. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgG-положительный . C. pneumoniae IgA-положительный . M. pneumoniae IgM и C. pneumoniae IgG-положительные . M. pneumoniae ПЦР-положительный .
      . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % . п . % .
      5-9 62 72.1 72,1 71.4 7 914 7 70 4 66,6 7 70 26 78.
      10-14 24 27,9 20 28,6 3 30 2 33,4 3 30 7 21,2
      86 100 70 100 10 100 6 100 10 100 33 100
      Пружина 24 28 р 20  28. 6 р 4 40 2 33,3
      лето 5 5,8 8,01 / 0,046 6 8,6 3,77 / 0,15 1 10 0
      10 11.6 7 10 1 10 2 33.3
      зима 47 54,6 37 52,8 4 40 2 33,3

      только частота положительного М .pneumoniae IgM зимой было обнаружено значительно выше по сравнению с другими сезонами с оценкой теста χ 2 ( P = 0,047, P < 0,05). Кроме того, заболеваемость C.pneumoniae Положительные результаты серологических тестов на IgM, IgG и IgA также были выше зимой, хотя статистически значимой разницы обнаружено не было (таблица 3). Среди инфекций нижних дыхательных путей у 49 (32,6%) пациентов с подозрением на атипичную пневмонию были положительные M. pneumoniae IgM (табл. 4).

      Таблица 4

      Связь между серологическими результатами M. pneumoniae и C. pneumoniae и социально-демографическими факторами, жалобами, диагнозом и клиническими данными

      . M. pneumoniae IgM-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение . C. pneumoniae IgG-положительный . Фишер p -значение . C. pneumoniae IgA-положительный . Фишер p -значение . M. pneumoniae IgM и Chlamydia IgG-положительные . Fisher p -значение .
      . п . % . . п . % . . п . % . . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный 16.7
      Plave 82 953 15,95 / 0,000 9 90 0,69 1 83,3 0,67 / 1 0 100 0,21
      4 4,7 1 10 10 5 10
      Дом курильщика в доме 79 89,9 11. 18 / 0,004 3 30 0,76 4 66,7 0,69 7 70 0,62
      Лихорадка 29 33,7 0,7 / 0,4 2 20 20 0.72 3 50 0.36 3 30 30 1
      Производственный кашель 74 86 15.01 / 0,000 4 40 0,07 3 50 0,68 3 30 0,09
      Диагноз 86 0,86 / 0,35 10 0,33 / 0,85 6
      УРТИ 86 100 5 50 1 16.7 0,22 / 0,14 6 60 0,52
      ИНДР 86 100 5 50 5 83,3 4 40
      Выводы Auscultation Lung 86 100 6. 01 / 0,015 8 80328 0,32 / 0,32 5 83.3 1,25 / 0,16 8 80 0,32
      Рентгенологически легких 41 59,3 14,53 / 0,002 2 20 1,71 / 0,63 41 66,6 5,97/0,13 5 50 0,56
      . M. pneumoniae IgM-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение . C. pneumoniae IgG-положительный . Фишер p -значение . C. pneumoniae IgA-положительный . Фишер p -значение . M. pneumoniae IgM и Chlamydia IgG-положительные . Fisher p -значение .
      . п . % . . п . % . . п . % . . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный     16.7
      Плита 82 95,3 15,95 / 0,000 9 90 0,69 1 83,3 0,67 / 1 0 100 0,21
      4 4,7 1 10 5 10
      Курильщик в доме 79 89. 9 11,18 / 0,004 3 30 0,76 4 66,7 0,69 7 70 0,62
      Лихорадка 29 33,7 0,7 / 0,4 2 2 20 0.72 3 50 50 0.36 3 30 1
      Производственный кашель 74 86 15.01 / 0,000 4 40 0,07 3 50 0,68 3 30 0,09
      Диагноз 86 0,86 / 0,35 10 0,33 / 0,85 6
      УРТИ 86 100 5 50 1 16.7 0,22 / 0,14 6 60 0,52
      ИНДР 86 100 5 50 5 83,3 4 40
      Выводы Auscultation Lung 86 100 6. 01 / 0,015 8 80328 0,32 / 0,32 5 83.3 1,25 / 0,16 8 80 0,32
      Рентгенологически легких 41 59,3 14,53 / 0,002 2 20 1,71 / 0,63 41 66,6 5.97 / 0.13 5.97 / 0.13 5 50 50 0.56 0.56
      Таблица 4

      Ассоциация между М. Пневмониями и C. Пневмониями Серологические результаты и социально-демографические факторы, жалобы, диагностики и клинические данные

      . M. pneumoniae IgM-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение . C. pneumoniae IgG-положительный . Фишер p -значение . C. pneumoniae IgA-положительный . Фишер p -значение . M. pneumoniae IgM и Chlamydia IgG-положительные . Fisher p -значение .
      . п . % . . п . % . . п . % . . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный 16.7
      Plave 82 953 15,95 / 0,000 9 90 0,69 1 83,3 0,67 / 1 0 100 0,21
      4 4,7 1 10 10 5 10
      Дом курильщика в доме 79 89,9 11. 18 / 0,004 3 30 0,76 4 66,7 0,69 7 70 0,62
      Лихорадка 29 33,7 0,7 / 0,4 2 20 20 0.72 3 50 0.36 3 30 30 1
      Производственный кашель 74 86 15.01 / 0,000 4 40 0,07 3 50 0,68 3 30 0,09
      Диагноз 86 0,86 / 0,35 10 0,33 / 0,85 6
      УРТИ 86 100 5 50 1 16.7 0,22 / 0,14 6 60 0,52
      ИНДР 86 100 5 50 5 83,3 4 40
      Выводы Auscultation Lung 86 100 6. 01 / 0,015 8 80328 0,32 / 0,32 5 83.3 1,25 / 0,16 8 80 0,32
      Рентгенологически легких 41 59,3 14,53 / 0,002 2 20 1,71 / 0,63 41 66,6 5,97/0,13 5 50 0,56
      . M. pneumoniae IgM-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение . C. pneumoniae IgG-положительный . Фишер p -значение . C. pneumoniae IgA-положительный . Фишер p -значение . M. pneumoniae IgM и Chlamydia IgG-положительные . Fisher p -значение .
      . п . % . . п . % . . п . % . . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный     16.7
      Плита 82 95,3 15,95 / 0,000 9 90 0,69 1 83,3 0,67 / 1 0 100 0,21
      4 4,7 1 10 5 10
      Курильщик в доме 79 89. 9 11,18 / 0,004 3 30 0,76 4 66,7 0,69 7 70 0,62
      Лихорадка 29 33,7 0,7 / 0,4 2 2 20 0.72 3 50 50 0.36 3 30 1
      Производственный кашель 74 86 15.01 / 0,000 4 40 0,07 3 50 0,68 3 30 0,09
      Диагноз 86 0,86 / 0,35 10 0,33 / 0,85 6
      УРТИ 86 100 5 50 1 16.7 0,22 / 0,14 6 60 0,52
      ИНДР 86 100 5 50 5 83,3 4 40
      Выводы Auscultation Lung 86 100 6. 01 / 0,015 8 80328 0,32 / 0,32 5 83.3 1,25 / 0,16 8 80 0,32
      Рентгенологически легких 41 59,3 14,53 / 0,002 2 20 1,71 / 0,63 41 66.6 5.97 / 0.13 5.97 / 0.13 5 50 50 0.56 0.56 0.56

      в случаях положительных М. Пневмония IgM антитела, курение в доме (χ 2 = 11.19, P < 0,05). В случаях, поступивших с продуктивным кашлем и данными аускультации легких, частота положительных антител M. pneumoniae IgM была обнаружена значительно выше (χ 2 = 15,01, p < 0,05). Не было обнаружено статистически значимой разницы между C. pneumoniae IgA, IgG, IgM-положительными случаями и социально-демографическими факторами, жалобами, диагнозом и клиническими данными (таблица 4). Среди лабораторных анализов количество лейкоцитов и СОЭ в первый час были выше у М.pneumoniae IgM-положительных случаев ( P <0,05, таблица 5).

      Таблица 5

      Анализ острофазовых реактивов M. pneumoniae IgM положительных и отрицательных случаев с помощью t-критерия Стьюдента

      . M. pneumoniae IgM положительный . Среднее значение ± стандартное отклонение отрицательное . т . р .
      лейкоцитарного 10196 ± 3870 9010 ± 3484 2,54 0,01
      Гемоглобин 12,3 ± 0,9 12,2 ± 0,9 0,24 0,81
      ГОС 5,2 ± 9.7 5.5 ± 9.8 5.5 ± 9.8 -0.18 0,85 0,85
      ESR-1 22 ± 13 17 ± 11 17 ± 11 3. 24 0.01 
      . M. pneumoniae IgM положительный . Среднее значение ± стандартное отклонение отрицательное . т . р .
      Leukocyte 10196 ± 3870 9010 ± 3484 254 2,50328 0,01 0,01
      Гемоглобин 123 ± 0,9 12,2 ± 0,9 0,24 0,81
      ГОС 5,2 ± 9,7 5,5 ± 9,8 -0,18 0,85
      СОЭ-1 22 ± 13 17 ± 11 3,24 0,01
      Таблица 5

      . M. pneumoniae IgM положительный . Среднее значение ± стандартное отклонение отрицательное . т . р . лейкоцитарного 10196 ± 3870 9010 ± 3484 2,54 0,01 Гемоглобин 12,3 ± 0,9 12,2 ± 0,9 0,24 0,81 ГОС 5.2 ± 9.7 5.5 ± 9.8 -0.18 0,85 ESR-1 22 ± 13 17 ± 11 17 ± 11 0,01 0,01

      ± 0,9
      . M. pneumoniae IgM положительный . Среднее значение ± стандартное отклонение отрицательное . т . р .
      Лейкоциты 10196 ± 3870 9010 ± 3484 2.54 0,01
      Гемоглобин 12,3 ± 0,9 12,2 0,24 0,81
      ГОС 5,2 ± 9,7 5,5 ± 9,8 -0,18 0,85
      СОЭ-1 22 ± 13 17 ± 11 3,24 0,01

      M.

      pneumoniae5 ПЦР 9025

      Метод полугнездовой ПЦР был проведен на 203 образцах и 33 (16.2%) из них были признаны положительными. В M. pneumoniae ПЦР-позитивных случаев не было обнаружено статистически значимой связи между социально-демографическими характеристиками, жалобами при поступлении и диагнозами (табл. 6). Чувствительность и специфичность метода ПЦР составили 20,1% и 85,7% соответственно по сравнению с серологической идентификацией M. pneumoniae IgM с помощью ИФА. Было установлено, что доля ложноположительных результатов метода ПЦР составляет 16,2% (таблица 7).

      Таблица 6

      Связь между M.pneumoniae Положительные случаи ПЦР и социально-демографические факторы, времена года, жалобы, диагнозы и клинические данные

      . M. pneumoniae ПЦР-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение .
      . п . % .
      Система отопления дома
      Central 31 93.9 3,72 / 0,05
      Плита 2 6,1
      сезоны
      Spring 7 21,2 18,24 / 0,032
      Лето 3 9.1 9.1
      15 15 45,5
      8 24.2
      Курильщик в доме 18 54,5 0,56
      лихорадку 11 33,3 0,52
      Продуктивный кашель 21 63,6 0,29
      Диагностика 33 16,2 1,01/0,31
      Инфекция верхних дыхательных путей. 17 51,5
      Инфекция нижних дыхательных путей. 16 48,5
      Легких аускультация 19 57,6 0,68 / 0,41
      рентгенография легких 17 51,5 1,48 / 0,68
      . M. pneumoniae ПЦР-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение .
      . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный 31 93,9 3,72 / 0,05
      Плита 2 6,1
      Времена года      
          Пружина 7 21. 2 18,24 / 0,032
      лето 3 9,1
      Падение 15 45,5
      зима 8 24,2
      Отношение к курению В доме 18 18 54,5 0.56 0.56
      Лихорадка 11 3 33,3 0.52 0.52
      Производственный кашель 21 63.6  0,29 
      Диагностика 33  16,2  1,01/0,31 
      17 51,5
      Инфекция нижних дыхательных путей. 16 16 485
      Auscultation Lung 19 57.6 57.6 0.68 / 0,41
      Республика от легких 17 51. 1,48/0,68 
      Таблица 6

      Связь положительных результатов ПЦР на M. pneumoniae с социально-демографическими факторами, временем года, жалобами, диагнозами и клиническими данными

      18,32724 / 0,032
      4 4 . M. pneumoniae ПЦР-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение .
      . п . % .
      Система отопления дома
      Центральный 31 93,9 3,72 / 0,05
      Плита 2 6,1
      Времена года      
          Пружина 21,2 
      лето 3 9,1
      Падение 15 45,5
      зима 8 24,2
      Курильщик в доме 18 18 54. 59 0.56
      Лихорадка 11 11 33,3 0.52 0.52
      Производственный кашель 21 63.6  0,29 
      Диагностика 33  16,2  1,01/0,31 
      17 51,5
      Инфекция нижних дыхательных путей. 16 16 485
      Auscultation Lung 19 57.6 57.6 0.68 / 0,41
      Республика от легких 17 51.5  1,48/0,68 
      аускультацию легких
      . M. pneumoniae ПЦР-положительный . χ 2 -испытание/ p -значение .
      . п . % .
      Система отопления дома
      Central 31 93.9 3,72 / 0,05
      Плита 2 6,1
      сезоны
      Spring 7 21,2 18,24 / 0,032
      Лето 3 9.1 9.1
      15 15 45,5
      8 24.2
      Курильщик в доме 18 54,5 0,56
      лихорадку 11 33,3 0,52
      Продуктивный кашель 21 63,6 0,29
      Диагностика 33 16,2 1,01/0,31
      Инфекция верхних дыхательных путей. 17 51,5
      Инфекция нижних дыхательных путей. 16 48,5
      19 57,6 0,68 / 0,41
      рентгенография легких 17 51,5 1,48 / 0,68
      Таблица 7

      Сравнение серологического метода и метода ПЦР в диагностике инфекций M. pneumoniae

      ПЦР ( ДНК M. pneumoniae )Пневмококк IgM) (Золотой стандарт)
      Положительный Отрицательный Итого
      Положительный 13 20 33
      Отрицательный 49 120 169
      Итого 62 140 202
      Итого
      ПЦР ( М. Пневмококк ДНК) серологии ( М. Пневмококк IgM) (Золотой стандарт)
      Положительный Отрицательный
      Положительный 13 20 33
      Отрицательный 49 120 169
      Итого 62 140 202
      Таблица 7

      Сравнение серологического метода и метода ПЦР в диагностике M.пневмонии инфекции

      ПЦР ( М. Пневмококк ДНК) серологии ( М. Пневмококк IgM) (Золотой стандарт)
      Положительный Отрицательный Итого
      Положительный 13 20 33
      Отрицательный 49 120 169
      Итого 62 140 202
      Итого
      ПЦР ( M.Пневмококк ДНК) серологии ( М. Пневмококк IgM) (Золотой стандарт)
      Положительный Отрицательный
      Положительный 13 20 33
      Отрицательный 49 120 169
      Итого 62 140 202

      Результаты ПЦР C.пневмонии

      Всего из 217 исследованных образцов C. pneumoniae оказался положительным у двух пациентов; один из которых серологически выявил C. pneumoniae IgM-положительные при титре 1/512, тогда как IgG и IgA были отрицательными. У другого пациента IgM оказался положительным при титре 1/32, однако IgG и IgA были отрицательными.

      Обсуждение

      Инфекции M. pneumoniae широко распространены во всем мире. В отличие от острых кратковременных эпидемий некоторых респираторных возбудителей, 90–183 M.pneumoniae имеет вспышки, происходящие каждые 4–7 лет. В нашем исследовании инфекция M. pneumoniae значительно чаще встречалась зимой, чем в другие сезоны. Но Фой, и др. . [11] сообщили, что инфекция M. pneumoniae не проявляла сезонных изменений в Сиэтле в течение 11-летнего периода.

      M. pneumoniae и C. pneumoniae , помимо инфекций нижних дыхательных путей, таких как пневмония, были зарегистрированы как этиологические агенты фарингита, синусита и среднего отита в верхних дыхательных путях [12].Попугай, и др. . [13], показали 12% M. pneumoniae положительных случаев среди пациентов с диагнозом фарингит в больнице. Griffin и Klein [14] сообщили, что M. pneumoniae были этиологическим агентом у большинства пациентов с синуситом. Так было у 24,7 и 32,6% больных фарингитом и синуситом соответственно. Курение в доме может увеличить риск инфекций дыхательных путей, инфекция M. pneumoniae была обнаружена чаще в случаях воздействия загрязненного воздуха в помещении или на открытом воздухе.

      Показатели симптоматической и бессимптомной инфекции различаются в разных исследованиях. В популяционных исследованиях частота бессимптомной инфекции составила 15–55% [15]. Первичная инфекция часто возникает у детей младшего возраста, а дети старшего возраста могут повторно заразиться при снижении иммунитета. Кашель, усталость и боль в горле являются общими симптомами, а лихорадка является симптомом госпитализированных пациентов с диагнозом пневмония. Продуктивный кашель был наиболее частым симптомом у детей и взрослых, однако простуда чаще наблюдалась у детей младшего возраста.Стивенс, и др. . [16] предположили, что кашель наблюдался у 97%, а лихорадка — у 20% из 44 детей с инфекцией M. pneumoniae . В нашем исследовании, хотя лихорадка не наблюдалась часто, было обнаружено, что особенно продуктивный кашель является одной из причин инфекции M. pneumoniae . При физикальном обследовании аускультация хрипов была частой находкой во всех исследованиях. В этом исследовании было обнаружено, что аускультация хрипов в легочных полях чаще встречается, особенно у 90–183 М.пневмонии инфекции. Это исследование еще раз показало, что инфекцию M. pneumoniae следует рассматривать у детей, поступивших с кашлем и не отвечающих на антибактериальную терапию с аускультативными хрипами в легочных полях.

      Хотя количество лейкоцитов у пациентов с инфекцией M. pneumoniae обычно находилось в пределах нормы, результаты исследования показали отклонения. Иногда повышалась СОЭ. Биберфилд, и др. . [17] сообщили о СОЭ> 50 мм в первый час у 16 ​​из 37 пациентов.Рентгенологические данные различаются при инфекциях M. pneumoniae и C. pneumoniae , и о таких специфических рентгенологических изображениях, связанных с этими инфекциями, не сообщалось. Сообщалось о гилярной лимфаденопатии, ретикулярном изображении, интерстициальной инфильтрации, крупозной пневмонии и плевральном выпоте. В проспективном многоцентровом исследовании, проведенном Esposito, et al . [18], не было обнаружено связи между лабораторными, рентгенологическими данными и M. pneumoniae , C.пневмонии инфекций. Однако в нашем исследовании количество лейкоцитов и СОЭ в первый час были значительно выше, особенно в случаях острой инфекции. В этом исследовании рентгенологические данные иногда оказывались положительными в случаях инфицирования M. pneumoniae в случаях; однако не было никакой разницы между частотами легочной интерстициальной инфильтрации.

      Поскольку клинические данные неспецифичны при инфекциях C. pneumoniae и M. pneumoniae , для диагностики важны специфические лабораторные тесты.Культура клеток одобрена в качестве золотого стандарта во всем мире для диагностики инфекций C. pneumoniae . Однако обнаружение C.pneumoinae в культурах клеток является сложным и затратным по времени методом. Поэтому были созданы серологические методы диагностики [19]. Тест микроиммунофлуоресценции (МИФ) выявляет антитела против C. pneumoniae . Однако в предыдущих исследованиях предполагалось, что только в 1/3 случаев с положительным посевом выявлена ​​положительная сероконверсия [20, 21].Лю, и др. . [22] с помощью метода ПЦР обнаружили 3,5% случаев инфицирования C. pneumoniae у 185 пациентов в возрасте до 5 лет. Также в нашем исследовании C. pneumoniae были серологически положительными в 3,5% случаев, а C. pneumoniae были положительными с помощью ПЦР в двух случаях острого инфицирования.

      Достижение специфичности и чувствительности 99 и 98% соответственно при использовании M. pneumoniae антител IgM и IgG вместе при диагностике M.pneumoniae инфекций [23, 24]. Антитела IgM могут оставаться отрицательными в ранние периоды острой инфекции. В исследовании Матти, и др. . [25], сравнивали обнаружение ДНК методом ПЦР и тесты на антитела IgM. Они предположили, что положительный результат теста M. pneumoniae IgM был точным, и метод ПЦР также может быть полезен для ранней диагностики. В исследовании Oguz, и др. . [26] Сообщалось, что тест ELISA столь же эффективен, чувствителен и быстр, как и ПЦР.В случае, когда ИФА считается золотым стандартом, чувствительность, положительные прогностические и отрицательные прогностические значения составляют 98, 92 и 82% соответственно [27]. В исследовании Raty, и др. . [28], M. pneumoniae был признан положительным у 37,5% из 32 молодых солдат с помощью ПЦР, проведенной на образцах мазка из носоглотки. В нашем исследовании частота положительных результатов теста M. pneumoniae IgM и ПЦР составила 30,2% и 16,3% соответственно. Однако в 14.2% из 90 183 M. pneumoniae 90 184 IgM отрицательных случаев, ПЦР была положительной. В этих случаях находились на ранней стадии инфекции. Потому что предполагалось, что ПЦР была положительной до появления антител M. pneumoniae IgM.

      В заключение, M. pneumoniae был частым возбудителем респираторных инфекций, но инфекции C. pneumoniae редко наблюдались у детей. Инфекция M. pneumoniae чаще встречалась в возрасте 5–9 лет и в зимний период.Положительный результат M. pneumoniae антител IgM оказался более чувствительным и специфичным, чем ПЦР для диагностики. Однако в 14,2% IgM-позитивных случаев, расцененных в раннем периоде инфекции, ПЦР может быть положительной. Кашель, лейкоцитоз, увеличение СОЭ и изображения легочной инфильтрации сопровождают наличие антител M. pneumoniae IgM. Курение в доме способствовало заражению M. pneumoniae . Сравнение диагностического теста для М.pneumoniae , серология антител оказалась более чувствительной и специфичной, чем ПЦР. Но ПЦР может быть полезна для ранней диагностики инфекции.

      Благодарности

      Секретариат исследовательского проекта Стамбульского университета поддержал исследование, номер проекта 65/2501203.

      Каталожные номера

      1,  ,  .

      Сирогианнопулос. Инфекция Chlamydia pneumoniae среди здоровых детей, госпитализированных с пневмонией в Греции

      21

       (стр. 

      300

      33

      )2,  ,  , и др.

      Оценка Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae как этиологических агентов постоянного кашля у подростков и взрослых

      40

       (стр. 

      637

      40

      )3.

      Роль Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae у детей с внебольничными инфекциями нижних дыхательных путей

      ,

      Clin Infect Dis

      ,

      2001

      , vol.

      32

       (стр.

      1281

      9

      )4,  .

      Новая роль Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae при инфекциях дыхательных путей у детей

      1

       (стр. 

      334

      44

      )5.

      Значение острых инфекций Mycoplasma pneumoniae и Clamydia pneumoniae у детей с одышкой

      16

       (стр. 

      1142

      6

      )6,  ,  , и др.

      Разработка основанного на геномике ПЦР-анализа для обнаружения Mycoplasma pneumoniae в крупной вспышке в штате Нью-Йорк

      ,

      J Clin Microbiol

      ,

      2001

      , vol.

      39

      стр.

      1385

       7,  ,  , и др.

      Повышенная чувствительность и специфичность иммуноферментных анализов с антигеном, обогащенным P1-адгезином, для выявления острой инфекции Mycoplasma pneumoniae

      44

       (стр. 

      27

      37

      )8,  .

      Сравнение пяти тестов для диагностики острых инфекций по Chlamydia pneumoniae

      ,

      Clin Diagn Lab Immunol

      ,

      2000

      , vol.

      7

       (стр. 

      739

      44

      )9,  ,  , и др.

      Быстрая диагностика инфекции дыхательных путей Chlamydia pneumoniae с помощью тестируемой полимеразной цепной реакции приземления в сравнении с посевом и обнаружением антигена с помощью ИФА

      175

       (стр. 

      1523

      6

      )10,  .

      Обнаружение Chlamydia pneumoniae и psittaci в образцах мокроты методом ПЦР

      46

       (стр. 

      313

      7

      )11,  ,  , и др.

      Многолетняя эпидемиология инфекций с Mycoplasma pneumoniae

      ,

      J Infect Dis

      ,

      1979

      , vol.

      139

       (стр. 

      681

      687

      )12,  ,  .

      Распространенность Mycoplasma pneumoniae у амбулаторных больных с нестрептококковой ангиной

      ,

      Fam Med

      ,

      1991

      , vol.

      23

       (стр. 

      117

      21

      )13.

      Вирусные заболевания дыхательных путей у детей

      ,

      Bull N Y Acad Med

      ,

      1963

      , том

      39

       (стр. 

      629

      48

      )14,  .

      Роль синусита в первичной атипичной пневмонии

      ,

      Clin Med

      ,

      1971

      , vol.

      78

       (стр. 

      23

      7

      )15,  .

      Острые инфекции нижних дыхательных путей у детей, не госпитализированных

      ,

      J Pediatr

      ,

      1986

      , vol.

      108

       (стр. 

      635

      46

      )16,  ,  , и др.

      Mycoplasma pneumoniae инфекции у детей

      ,

      Arch Dis Child

      ,

      1978

      , vol.

      53

       (стр. 

      38

      42

      )17,  ,  .

      Исследования инфекции Mycoplasma pneumoniae в Швеции

      ,

      Acta Pathol Microbiol Scand

      ,

      1965

      , vol.

      63

       (стр. 

      469

      75

      )18,  ,  , и др.

      Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae у детей pneumoniae

      ,

      Eur Respir J

      ,

      2001

      , vol.

      17

       (стр. 

      241

      5

      )19,  ,  , и др.

      Новый штамм Chlamydia psittaci, TWAR, выделенный при острых инфекциях дыхательных путей

      315

       (стр. 

      161

      8

      )20.

      Chlamydia pneumoniae (TWAR) инфекции у детей

      ,

      Pediatr Infect Dis J

      ,

      1994

      , vol.

      13

       (стр. 

      675

      84

      )21,  ,  .

      Реакция антител на инфекцию Chlamydia pneumoniae у детей с респираторными заболеваниями

      ,

      J Infect Dis

      ,

      1998

      , vol.

      177

       (стр. 

      720

      724

      )22,  ,  , и др.

      Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae у детей раннего возраста из Китая с внебольничной пневмонией

      ,

      Microbiol Infect Dis

      ,

      2005

      , vol.

      52

       (стр.

      7

      14

      )23, , и др.

      Методы ИФА в диагностике Mycoplasma pneumoniae инфекций дыхательных путей у детей

      72

       (стр. 

      383

      8

      )24,  ,  , и др.

      Оценка 12 коммерческих тестов и теста связывания комплемента для Mycoplasma pneumoniae , специфичных к иммуноглобулину G (IgG) и антител IgM, с использованием ПЦР в качестве «золотого стандарта».

      43

       (стр. 

      2277

      85

      )25,  ,  , и др.

      Диагностика Mycoplasma pneumoniae Пневмония у детей

      ,

      J Clin Microbiol

      ,

      1998

      , vol.

      36

       (стр. 

      3155

      9

      )26,  ,  , и др.

      Частота Mycoplasma pneumoniae среди атипичных пневмоний детского возраста

      ,

      Turk J Pediatr

      ,

      2002

      , vol.

      44

       (стр. 

      283

      8

      )27,  ,  , и др.

      Диагностическая полезность и клиническая значимость образцов носо- и ротоглотки, используемых в ПЦР-анализе для диагностики инфекции Mycoplasma pneumoniae у детей с внебольничной пневмонией

      42

       (стр. 

      3339

      41

      )28,  ,  .

      Тип образца имеет решающее значение для диагностики Mycoplasma pneumoniae пневмонии с помощью ПЦР

      54

       (стр. 

      287

      291

      )

      © Автор [2007]. Опубликовано издательством Оксфордского университета. Все права защищены. Чтобы получить разрешение, отправьте электронное письмо по адресу: [email protected]

      .

      Лабораторная диагностика инфекции Mycoplasma pneumoniae

      https://doi.org/10.1046/j.1469-0691.2003.00590.xGet rights and content

      Диагностика инфекции Mycoplasma pneumoniae затруднена из-за прихотливого характера возбудителя, значительная серопревалентность и возможность транзиторного бессимптомного носительства.В последние годы для диагностики инфекции M. pneumoniae были адаптированы различные новые методы, особенно в области молекулярной биологии. Стандартная полимеразная цепная реакция (ПЦР) в настоящее время является методом выбора для прямого обнаружения патогенов, но некоторые методы, связанные с ПЦР, обеспечивают повышенную чувствительность или более удобные процедуры обработки и успешно применяются в исследовательских целях. Среди этих методов ПЦР в реальном времени, вложенная ПЦР, ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) и мультиплексная ПЦР.Как правило, методы, основанные на амплификации, заменили анализы гибридизации и прямое обнаружение антигена. Серология, которая является основной стратегией диагностики микоплазмы в рутинной клинической практике, была усовершенствована благодаря широкой доступности чувствительных анализов для раздельного обнаружения различных классов антител. Для диагностики микоплазменной пневмонии следует сочетать серологию и прямое выявление возбудителя. Внелегочные заболевания могут быть диагностированы только путем прямого выявления возбудителя, но ценность этого диагностического подхода ограничена, вероятно, иммунологически опосредованным патогенезом некоторых проявлений.В этом обзоре обобщается текущее состояние диагностики Mycoplasma pneumoniae с особым упором на молекулярные методы. Обсуждается значение различных методов для рутинной диагностики и исследовательских целей.

      Ключевые слова

      Ключевые слова

      ключевых слов

      Лабораторный диагноз

      Серология

      Изоляция микоплазмы

      Молекулярные методы

      Электропульговые методы

      Рекомендуемые статьи

      Copyright © 2003 Европейское общество клинических инфекционных заболеваний.Опубликовано Elsevier Ltd. Все права защищены.

      Границы | Связь между Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae, опасным для жизни состоянием у маленьких детей — клинический случай и обзор литературы

      Введение

      Внебольничная пневмония представляет собой острую инфекцию легких, диагностированную у ранее здорового человека, проявляющуюся подозрительными клиническими симптомами и визуализацией легких (1). Это состояние является важной ведущей причиной смерти детей в возрасте до 5 лет, ежегодно унося до 2 миллионов жизней (2). Mycoplasma pneumoniae (MP) и Chlamydia pneumoniae (CP) — два атипичных патогена, которые могут вызывать легкие, средние или тяжелые острые респираторные инфекции (3). Распространенность инфекций, вызванных этими двумя возбудителями, в детском возрасте сильно различается по всему миру в зависимости от времени года и географического района (3). Таким образом, последние данные подчеркивают самую высокую заболеваемость в возрасте от 1 до 7 лет с пиком в возрасте около 5 лет (4). Клинический спектр инфекции МП варьирует от легких случаев трахеобронхита до тяжелых случаев атипичной пневмонии, сопровождающейся широким спектром внелегочных осложнений (5), тогда как КП, другой возбудитель, участвующий в развитии внебольничной пневмонии, также может вызывать фарингит, бронхит. и синусит (6).Несмотря на самокупирующийся характер, инфекция МП также может редко приводить к опасным для жизни состояниям, таким как острая респираторная недостаточность, фульминантная пневмония, некротизирующий пневмонит или рефрактерная пневмония (7, 8). Инкубационный период для этой группы прихотливых, медленно растущих возбудителей, включающей также Legionella pneumophila, достигает до 3 недель и определяется дополнительными неспецифическими клиническими признаками, такими как кашель, лихорадка и недомогание, вызванные также другими микроорганизмами (9, 10). Более того, как МП, так и ХП ассоциировались с наличием или обострением астмы у детей и даже с хрипами у детей без предшествующего диагноза астмы (11, 12).

      Общеизвестно, что основные проблемы, связанные с лечением инфекций нижних дыхательных путей у детей, заключаются в определении возбудителя инфекции. Несмотря на их повсеместное распространение, как МП, так и ХП обычно не диагностируются, поскольку их трудно выращивать в культуре, и для них требуются специальные методы культивирования или они представляют собой длительный период инкубации, чтобы подтвердить или исключить их присутствие (13). Таким образом, стандартизированные, быстрые и специфические диагностические тесты, безусловно, улучшат их выявляемость у детей, что приведет к лучшим результатам в тяжелых случаях.Среди этих тестов обычно используются серологические тесты или определение последовательностей нуклеиновых кислот и ДНК (14). Серологические тесты очень полезны для обнаружения этих двух атипичных бактерий, но их точная интерпретация может быть затруднена из-за ранее существовавших антител IgG у большинства людей из-за предшествующего контакта (15). Тем не менее, положительные IgM-антитела представляют определенную ценность для диагностики острой фазы инфекции как в случае МП, так и в случае ХП. Визуализация легких, состоящая из рентгенографии грудной клетки или компьютерной томографии грудной клетки, подтверждает диагноз поражения легких, демонстрируя различные аспекты, варьирующие от интерстициальной пневмонии до массивной пневмонии с плевральным выпотом.За исключением низкого выхода культур в случае атипичных бактерий, сложность получения соответствующих образцов культур и нежелание лиц, осуществляющих уход, разрешать своим детям аспирацию легких и бронхоальвеолярный лаваж, дополнительно усугубляют проблемы в постановке соответствующего диагноза (16). Тем не менее, осведомленность педиатров об этих атипичных бактериях как возбудителях внебольничной пневмонии у детей, предполагающая тщательный сбор анамнеза и клиническое обследование (17) наряду с соответствующими серологическими тестами или полимеразной цепной реакцией, если таковые имеются, определенно увеличивает частоту ранней диагностики.

      В-лактамные антибиотики обычно являются препаратами первого выбора при лечении инфекций нижних дыхательных путей и обычно используются в качестве эмпирической терапии, но их эффективность при МП и ХП либо низкая, либо вообще отсутствует. Несмотря на то, что большинство случаев диагностированной внебольничной пневмонии, вызванной инфекцией МП или ХП, проходят самостоятельно, для определенных групп пациентов могут потребоваться антибиотики, такие как макролиды, тетрациклины или фторхинолоны (18). Таким образом, ранняя диагностика и соответствующее выявление этиологического агента с учетом этих случаев, когда антибиотики имеют большое значение, представляют собой факторы, влияющие на исход.

      Наша цель, представляя этот случай, состояла в том, чтобы подчеркнуть особенности эволюции, а также проблемы диагностики и лечения у маленького ребенка с внебольничной пневмонией, вызванной коинфекцией МП и ХП.

      Письменное информированное согласие было получено от матери пациента до публикации этого случая .

      История болезни

      Выражение опасений

      Мы сообщаем о случае мальчика в возрасте 2 лет и 9 месяцев, поступившего в нашу клинику с продолжительной лихорадкой, сухим кашлем и одышкой.Заболевание началось ~7 дней до поступления с лихорадкой (39°С) и сухим кашлем, в связи с чем ему было рекомендовано симптоматическое лечение терапевтом, но симптомы ухудшились, в связи с чем он был госпитализирован в нашу клинику.

      Клинические данные

      При клиническом осмотре при поступлении выявлено влияние на общее состояние, бледность, гиперемированность зева, ослабление дыхательных шумов в нижних отделах правой грудной клетки, хрипы в правом легком, тахипноэ (45/мин), сатурация кислорода 85%, тахикардия ( 154 уд/мин).

      Диагностический фокус и оценка

      Лабораторные анализы, проведенные в день поступления, показали лейкоцитоз (Leu 23 890/мкл) с нейтрофилией (Neu 20 430/мкл), анемию (гемоглобин 10 г/дл) и повышенные биомаркеры воспаления (С-реактивный белок – СРБ 303 мг/мкл). л, скорость оседания эритроцитов — СОЭ 100 мм/ч). Культура крови была отрицательной. Рентгенография грудной клетки выявила плевральный выпот, что вызвало подозрение на нижнеправую пневмонию.

      Терапевтический фокус и оценка

      Мы начали эмпирическое лечение цефалоспорином 3-го класса (цефтриаксон) и оксациллином с чрезвычайно благоприятной динамикой в ​​течение примерно 7 дней со значительным улучшением клинических симптомов и биомаркеров воспаления (отсутствие лихорадки, СРБ 14.1 мг/л). Тем не менее, на 8-й день госпитализации вновь появилась лихорадка, в связи с чем мы повторили лабораторные исследования, отметив повышение уровня лейкоцитов (Leu 33 440/мкл) и острофазовых реагентов (СРБ 82,96 мг/л, СОЭ 140 мм/ч), а также снижение гемоглобина (6,6 г/дл), но клетки периферической крови были в норме. Мы повторили экстренную рентгенографию грудной клетки, которая выявила большее количество плеврального выпота, поэтому был выполнен хирургический дренаж с введением плевральной трубки на 7 дней (рис. 1).Внешний вид плевральной жидкости был прозрачным, желтоватого цвета, а цитология и посев были отрицательными. Мы исключили туберкулез легких на основании отрицательного результата исследования желудочного сока натощак, полученного через назогастральный зонд, но консультация пульмонолога вызвала подозрение на метициллин-резистентный Staphylococcus aureus , рекомендовав антибиотики широкого спектра действия (меропенем и ванкомицин). Также было проведено переливание крови. После ~ 5 дней лечения антибиотиками, упомянутыми выше, лихорадка сохранялась, и мы не обнаружили улучшения лабораторных показателей.Основываясь на изначально исключительно благоприятном развитии, мы заподозрили возможную суперинфекцию и выявили положительные IgM как для MP, так и для CP (индекс IgM анти-MP 15, IgG анти-MP 0,1 ЕД/мл, IgM анти-CP 42,3 ЕД). /мл и IgG анти-CP 17,4 ед/мл). Установили диагноз пневмонии, обусловленной коинфекцией МП и ХП, и заменили антибактериальную терапию на левофлоксацин на 10 дней. На 5-й день левофлоксацина мы выполнили компьютерную томографию грудной клетки, которая показала плевральный выпот с инкапсулированным окном легкого (рис. 2, 3), и мы перекрыли дренажную трубку грудной клетки.Мы выписали больного на 10-й день левофлоксацина с рекомендацией продолжить лечение кларитромицином перорально в течение 7 дней.

      Рисунок 1 . На рентгенограмме грудной клетки выявляется правосторонний плеврит.

      Рисунок 2 . КТ грудной клетки — многоплоскостная реконструкция легкого, инкапсулированный плевральным выпотом с окном и дренажной трубкой.

      Рисунок 3 . КТ грудной клетки — многоплоскостная реконструкция плеврального выпота с окном в мягких тканях и дренажной трубкой.

      Последующие действия и результат

      Мы повторили лабораторные тесты после 7 дней приема кларитромицина, и все они были в пределах нормы, а также рентгенографию грудной клетки, которая выявила уменьшенное количество инкапсулированного плеврального выпота (рис. 4). Поэтому мы решили уменьшить дозу кларитромицина на 1/3 от начальной на 1 месяц. Более того, примерно через 1 месяц после первоначального диагноза мы заметили сероконверсию с точки зрения IgG как для MP, так и для CP (IgG анти-MP 70 ЕД/мл и IgG анти-CP 100 ЕД/мл).Рентгенография грудной клетки, выполненная примерно через 6 месяцев, выявила лишь небольшое утолщение нижней правой части плевры (рис. 5).

      Рисунок 4 . Рентгенологический аспект во время выписки.

      Рисунок 5 . Рентгенограмма грудной клетки через 6 месяцев выявила лишь минимальное утолщение нижней правой плевры.

      Обсуждения

      MP и CP являются двумя атипичными патогенами, которые в последние годы все чаще обнаруживаются как вызывающие внебольничную пневмонию у детей (5).Распространенность обоих возбудителей широко варьирует у детей с острыми респираторными инфекциями, достигая 40% (19). Сообщается, что их инкубационный период составляет от 2 до 4 недель, и они передаются воздушно-капельным путем в течение года (20). Инкубационный период в нашем случае составил более 2 нед, однако необходимо учитывать, что эти два атипичных возбудителя могли быть причиной суперинфекции на основании благоприятного течения больного в течение 1-й недели госпитализации при лечении по 3 классу. цефалоспорины и оксациллин в качестве эмпирической терапии.Несмотря на возможные вспышки в учреждениях, скорость их передачи значительно выше между членами семьи или людьми, живущими в непосредственной близости (20). Ни у кого из членов семьи или других лиц, которые тесно общались с нашим пациентом, не было никаких симптомов, указывающих на возможную передачу инфекции. Недавнее исследование показало, что самая высокая распространенность как МП, так и ХП встречается у младенцев в возрасте от 29 дней до 2 месяцев жизни и детей в возрасте от 1 до 5 лет (19). Более того, сообщалось, что тяжесть заболевания варьирует в зависимости от возраста: доказано, что при МП тяжелая внебольничная пневмония возникает примерно через ~21 мес, при ХП ~49 мес, а при коинфекции МП и ХП ~24 мес (21).Точно так же возраст нашего пациента на момент постановки диагноза составлял 33 месяца. Тем не менее, принимая во внимание возможное самокупирующееся течение пневмонии, вызванной этими двумя атипичными агентами, объяснением этих данных может быть тот факт, что обычно исследования проводятся на госпитализированных детях, которые обычно имеют симптоматику. Было доказано, что курение в доме является фактором риска инфекций дыхательных путей (14). В нашем случае мать пациентки была курильщиком.

      Клинический спектр МП и ХП пневмонии включает кашель, утомляемость, боль в горле и лихорадку у госпитализированных пациентов (14).Более того, продуктивный кашель был зарегистрирован как наиболее частый симптом у пациентов с МП-инфекцией, составляющий около 97% случаев, тогда как лихорадка была описана у 20% из них (22). У нашего пациента были как продуктивный кашель, так и длительная лихорадка. Другим хорошо задокументированным фактом является то, что первичная инфекция обычно возникает в более молодом возрасте, тогда как реинфекция возможна у детей старшего возраста при снижении иммунитета или в зависимости от генетической предрасположенности (14, 23). Первичная инфекция является наиболее вероятной возможностью в нашем случае, исходя как из его небольшого возраста, так и из-за ранее здорового состояния.Физикальное обследование обычно выявляет хрипы в легочных полях как при МП, так и при ХП инфекции, хотя чаще они отмечались при МП (14). При клиническом осмотре нашего пациента при поступлении также выявлены хрипы в правом легком. Что касается лабораторных тестов и имажинистических исследований, результаты, о которых сообщается в литературе, противоречивы. Так, исследование, проведенное Esposito et al. (24) не выявили связи ни между лабораторными параметрами, ни рентгенологическими данными и инфекциями МП или ХП.Напротив, другие исследования показали, что количество лейкоцитов и СОЭ были значительно выше, особенно в острых случаях (14). Снижение гемоглобина является хорошо известным маркером инфекции, но оно также может наблюдаться при длительном воспалении, острой кровопотере или некоторых интоксикациях (9, 25–27). У нашего пациента отмечалось стойкое повышение количества лейкоцитов и СОЭ более 100 мм/ч. Исходное значение СРБ составило 303 мг/л и значительно снизилось после 1-й недели приема. Несмотря на то, что через этот период его состояние снова ухудшилось, значение СРБ было значительно ниже исходного.Значение гемоглобина снижалось при поступлении, требующем переливания крови. Таким образом, можно снова предположить, что МП и ХП в нашем случае представляют собой коинфекции и что исходное состояние было вызвано совершенно другим агентом, скорее всего, β-лактам-чувствительным.

      У пациентов с внебольничной пневмонией, вызванной атипичными бактериями, включая интерстициальную инфильтрацию, ретикулярный аспект, внутригрудную лимфаденопатию, крупозную пневмонию и плевральный выпот, сообщалось о широком спектре рентгенологических находок (14).В нашем случае рентгенологические данные включали правостороннюю крупозную пневмонию и плевральный выпот, требующий хирургического дренирования. Несмотря на то, что культура клеток признана золотым стандартом диагностики инфекций МП и ХП, этому препятствует их медленный рост и необходимость особых условий выращивания. Серологические тесты являются полезным диагностическим инструментом при правильном использовании. Таким образом, исследование, проведенное на индийских детях, показало, что обнаружение МП было возможно только на основании положительного IgM в большинстве случаев, включенных в исследование (28).Диагноз в нашем случае также был поставлен на основании положительного IgM как для МП, так и для ХП. Тем не менее Ли и соавт. (29) доказали, что краткосрочные парные IgM-анти-MP в острой фазе могут быть точным диагностическим инструментом для MP-пневмонии. Пневмонии, вызванные атипичными возбудителями, обычно требуют антимикробных препаратов, особенно у детей в возрасте до 5 лет, из-за их осложненного течения в этой группе (28). Скорее всего, эволюции в нашем случае также мешал как малый возраст, так и наличие коинфекции.Другое исследование, включавшее 1104 японских ребенка с острыми инфекциями нижних дыхательных путей, выявило острую инфекцию ХП в 149 случаях, острую инфекцию МП у 118 детей и наличие обоих только у 27 пациентов (30). Эффективное лечение этих типов инфекций может быть достигнуто либо макролидами, либо фторхинолонами (18, 28). Мы решили начать лечение фторхинолонами внутривенно в связи с тяжелым состоянием больного и по согласованию с детским хирургом продолжили лечение макролидами перорально на основании стойкости рентгенологических изменений.

      Патогенез острого поражения легких при атипичных бактериях до конца не изучен. Тем не менее, кажется, что МП пневмония соответствует гипотезе PHS, в которой адаптивная иммунная система осуществляет контроль над патогенными или этиологическими белковыми веществами посредством рекомбинации иммунных генов для рецепторов как В-, так и Т-клеток (31). Более того, врожденная иммунная система способна контролировать более крупные вещества, такие как бактерии, интактные вирусы и апоптотические тельца, посредством фагоцитов; в то время как толл-подобные рецепторы, комплементы, естественные антитела и другие иммунные белковые системы осуществляют контроль над более мелкими небелковыми веществами, среди которых вирусные ДНК и РНК, а также полисахариды (31).Таким образом, инфекция MP, скорее всего, приводит к острому повреждению клеток органов, что в дальнейшем приводит к гипериммунным реакциям и, следовательно, к критическому иммуноопосредованному повреждению легких, аналогичному COVID-19 (31). Скорее всего, у нашего пациента также развился гипериммунный ответ на эту инфекцию, дополнительно усиленный предшествующим или одновременным наличием ХП. Основываясь на вышеупомянутой гипотезе, использование кортикостероидов в этих случаях может быть полезным, принимая во внимание их роль в индукции ранней стабилизации гипериммунных ответов путем воздействия на иммунную систему хозяина (31).Полезность кортикостероидов на ранней стадии MP-пневмонии была подтверждена Yang et al. (4) в исследовании 257 детей, доказывающем, что это может быть связано с более низкой заболеваемостью, предотвращая прогрессирование этого состояния. Наши пациенты получали кортикостероиды в течение первых 5 дней госпитализации, учитывая низкую сатурацию кислорода, действительно с исключительно благоприятным фактом эволюции, что еще раз свидетельствует о наиболее вероятном присутствии другого возбудителя изначально.

      Ограничения этого отчета о клиническом случае заключаются в относительной задержке с точки зрения диагноза, но признание и сообщение о проблемах, связанных с этим, может считаться очень важным в повседневной практике, и это может улучшить осведомленность педиатра об особенностях этих атипичных бактерий в малых дети.Другое важное ограничение представлено тем фактом, что мы не могли использовать другие диагностические инструменты, кроме серологических, таких как тест на основе полимеразной цепной реакции или посев, но принимая во внимание начальную серопозитивность как IgM анти-MP, так и Ig-M анти-MP. -ХП, связанный с отрицательными IgG для обеих бактерий, чрезвычайно благоприятная эволюция после начала лечения левофлоксацином и дальнейшая сероконверсия IgG для обоих атипичных агентов, мы считаем, что имеем право подтвердить наш диагноз.

      Важно также признать еще одно возможное обстоятельство, состоящее в том, что у нашего пациента могла быть недавняя предшествующая инфекция ДЦП с дальнейшим инфицированием МП и развитием тяжелой формы МП-пневмонии. Недавнее заражение ХП могло вызвать аномальный иммунный ответ с точки зрения инфекции МП, что привело к тяжелым повреждениям легких. Таким образом, как одновременная коинфекция, так и предшествующая инфекция ХП, а затем инфекция МП могут привести к такой же опасной для жизни тяжелой форме атипичной пневмонии, как и у нашего пациента, который, насколько нам известно, является первым случаем, зарегистрированным в Румынии. с тяжелой внебольничной пневмонией из-за взаимодействия МП и ХП.

      Выводы

      MP и CP являются двумя атипичными патогенами, которые трудно диагностировать из-за их медленного роста. Несмотря на их самоограничивающуюся особенность, связь между ними может нести жизненный риск у маленьких детей, особенно при отсутствии надлежащего и своевременного диагноза.

      Заявление о доступности данных

      Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью/дополнительный материал, дальнейшие запросы можно направлять соответствующему автору/авторам.

      Заявление об этике

      Письменное информированное согласие было получено от матери пациента до публикации этого случая.

      Вклад авторов

      CM, LM и MS разработали концепцию и разработали исследование, составили первоначальный вариант рукописи, а также рассмотрели и отредактировали рукопись. MS и IS разработали инструменты для сбора данных, собрали данные, провели первоначальный анализ, а также рассмотрели и отредактировали рукопись. Все авторы одобрили окончательный вариант рукописи в представленном виде и соглашаются нести ответственность за все аспекты работы.

      Конфликт интересов

      Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

      Каталожные номера

      2. Nair H, Simões EA, Rudan I, Gessner BD, Azziz-Baumgartner E, Zhang JSF, et al. Глобальное и региональное бремя госпитализаций по поводу тяжелых острых инфекций нижних дыхательных путей у детей раннего возраста в 2010 г.: систематический анализ. Ланцет. (2013) 381:1380–90. doi: 10.1016/S0140-6736(12)61901-1

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      3. Chen Z, Ji W, Wang Y, Yan Y, Zhu H, Shao X, et al. Эпидемиология и ассоциации с климатическими условиями инфекций Mycoplasma pneumoniae и Chlamydophila pneumoniae среди китайских детей, госпитализированных с острыми респираторными инфекциями. Ital J Pediatr. (2013) 39:34. дои: 10.1186/1824-7288-39-34

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      4.Ян Э.А., Кан Х.М., Рим Дж.В., Кан Дж.Х., Ли К.И. Ранняя кортикостероидная терапия пневмонии, вызванной Mycoplasma pneumoniae , независимо от применяемых антибиотиков у детей. J Clin Med. (2019) 8:726. doi: 10.3390/jcm8050726

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      5. Песня Q, Сюй Б.П., Шэнь К.Л. Влияние бактериальных и вирусных коинфекций Mycoplasma pneumoniae pneumonia на детей: аналитический отчет Пекинской детской больницы за период с 2010 по 2014 год. Int J Clin Exp Med. (2015) 8:15666–74.

      Реферат PubMed | Академия Google

      6. Dumke R, Schnee C, Pletz MW, Rupp J, Jacobs E, Sachse K, et al. Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia spp. инфекции при внебольничной пневмонии, Германия, 2011-2012 гг. Emerg Infect Dis. (2015) 21:426–34. дои: 10.3201/eid2103.140927

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      7. Sztrymf B, Jacobs F, Fichet J, Hamzaoui O, Prat D, Avenel A, et al.[Микоплазменная пневмония: редкая причина острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС) и потенциальной устойчивости к антибиотикам]. Rev Mal Respir. (2013) 30:77–80. doi: 10.1016/j.rmr.2012.06.012

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      8. Wang RS, Wang SY, Hsieh KS, Chiou YH, Huang IF, Cheng MF, et al. Некротизирующий пневмонит, вызванный Mycoplasma pneumoniae , у детей: отчет о пяти случаях и обзор литературы. Pediatr Infect Dis J. (2004) 23:564–7. doi: 10.1097/01.inf.0000130074.56368.4b

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      10. Маргинян К.О., Мелиц Л.Е., Гозар Л., Маргинян К.Д., Маргинян М.О. Неполная рефрактерная болезнь Кавасаки у младенца — отчет о клиническом случае и обзор литературы. Передний педиатр. (2018) 6:210. doi: 10.3389/fped.2018.00210

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      11.Клайд В.А. Клинический обзор типичных инфекций Mycoplasma pneumoniae . Clin Infect Dis. (1993) 17 (Приложение 1): S32–6.

      Реферат PubMed | Академия Google

      12. Фреймут Ф., Вабрет А., Бруар Дж., Тутен Ф., Вердон Р., Петитжан ​​Дж. и соавт. Выявление вирусной, Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae инфекций при обострениях бронхиальной астмы у детей. J Клин Вирол. (1999) 13:131–9. doi: 10.1016/S1386-6532(99)00030-X

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      13.Pientong C, Ekalaksananan T, Teeratakulpisarn J, Tanuwattanachai S, Kongyingyoes B, Limwattananon C. Атипичная бактериальная инфекция у детей с острым бронхиолитом на северо-востоке Таиланда. J Microbiol Immunol Infect. (2011) 44:95–100. doi: 10.1016/j.jmii.2010.02.001

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      14. Сидал М., Килич А., Унувар Э., Огуз Ф., Онел М., Агачфидан А. и др. Частота инфекций Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae у детей. J Trop Pediatr. (2007) 53:225–31. doi: 10.1093/тропей/fmm003

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      16. Harris M, Clark J, Coote N, Fletcher P, Harnden A, McKean M, et al. Рекомендации Британского торакального общества по лечению внебольничной пневмонии у детей: обновление 2011 г. Thorax. (2011) 66 (Приложение 2): ii1–23. doi: 10.1136/thoraxjnl-2011-200598

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      17.Mărginean CO, Melit LE, Chinceşan M, Mureşan S, Georgescu AM, Suciu N, et al. Коммуникативные навыки в педиатрии — взаимоотношения педиатра и ребенка. Медицина. (2017) 96:e8399. дои: 10.1097/MD.0000000000008399

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      18. Nilsson AC, Björkman P, Persson K. Полимеразная цепная реакция превосходит серологию в диагностике острой инфекции Mycoplasma pneumoniae и выявляет высокую частоту персистирующей инфекции. ВМС микробиол. (2008) 8:93. дои: 10.1186/1471-2180-8-93

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      19. Дель Валье-Мендоса Дж., Орельяна-Перальта Ф., Марсело-Родригес А., Верн Э., Эскивель-Вискарра М., Сильва-Касо В. и др. Высокая распространенность Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae у детей с острыми респираторными инфекциями из Лимы, Перу. ПЛОС ОДИН. (2017) 12:e0170787. doi: 10.1371/journal.pone.0170787

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      20.Principi N, Esposito S. Новая роль Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae при инфекциях дыхательных путей у детей. Ланцет Infect Dis. (2001) 1:334–44. doi: 10.1016/S1473-3099(01)00147-5

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      21. Samransamruajkit R, Jitchaiwat S, Wachirapaes W, Deerojanawong J, Sritippayawan S, Prapphal N. Распространенность Mycoplasma и Chlamydia pneumonia при тяжелой внебольничной пневмонии среди госпитализированных детей в Таиланде. Jpn J Infect Dis. (2008) 61:36–9.

      Реферат PubMed | Академия Google

      24. Эспозито С., Блази Ф., Беллини Ф., Аллегра Л., Принципи Н., Исследовательская группа Маугли. Инфекции Mycoplasma pneumoniae и Chlamydia pneumoniae у детей с пневмонией. Группа изучения Маугли. Eur Respir J. (2001) 17:241–5. дои: 10.1183/036.01.17202410

      Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

      25. Мелит Л.Е., Маргинян С.О., Мокану С., Маргинян М.О.Редкий случай гастрита, вызванного таблетками железа, у девочки-подростка: описание случая и обзор литературы. Медицина. (2017) 96:e7550. дои: 10.1097/MD.0000000000007550

      Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

      26. Маргинян М.О., Маргинян К.О., Мелит Л.Е., Войдазан С., Молдован В., Бэнеску С. Влияние генетической предрасположенности хозяина на инфекцию Helicobacter pylori у детей. Медицина. (2017) 96:e7612. дои: 10.1097/MD.0000000000007612

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      27.Маргинян К.О., Мелит Л.Е., Молдован Х., Лупу В.В., Маргинян М.О. Отравление свинцом у 16-летней девочки: описание случая и обзор литературы (в соответствии с CARE). Медицина. (2016) 95:e4916. doi: 10.1097/MD.0000000000004916

      Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

      28. Махешвари М., Кумар С., Сетхи Г.Р., Бхалла П. Обнаружение Mycoplasma pneumoniae у детей с инфекциями нижних дыхательных путей. Троп Док. (2011) 41:40–2. doi: 10.1258/тд.2010.100149

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      29. Lee SC, Youn YS, Rhim JW, Kang JH, Lee KY. Ранняя серологическая диагностика Mycoplasma pneumoniae Pneumonia: обсервационное исследование изменений титров специфических IgM-антител и холодовых агглютининов. Медицина. (2016) 95:e3605. doi: 10.1097/MD.0000000000003605

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      30. Оучи К., Комура Х., Фуджи М., Мацусима Х., Маки Т., Хасегава К. и др.[Инфекция Chlamydia pneumoniae и инфекция Mycoplasma pneumoniae у педиатрических пациентов]. Кансенсёгаку Дзаси. (1999) 73:1177–82. doi: 10.11150/kansenshogakuzasshi1970.73.1177

      Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

      Инфекции Chlamydiae и Mycoplasma при лимфоме MALT легких

    • Anttila TI, Lehtinen T, Leinonen M, Bloiqu A, Koskela P, Lehtinen M, Saikku P (1998) Серологические доказательства связи между хламидийными инфекциями и злокачественными лимфомами. Br J Haematol 103 : 150–156, doi:10.1046/j.1365–2141.1998.00942.x

      CAS Статья Google ученый

    • Bjornsson E, Hjelm E, Janson C, Fridell E, Boman G (1996) Серология Chlamydia в отношении астмы и гиперреактивности бронхов. Scand J Infect Dis 28 : 63–69

      CAS Статья Google ученый

    • Cerroni L, Zochling N, Putz B, Kerl H (1997) Заражение Borrelia burgdorferi и кожная B-клеточная лимфома. J Cutan Pathol 24 : 457–461, doi:10.1111/j.1600–0560.1997.tb01318.x

      CAS Статья Google ученый

    • Чанудет Э., Чжоу Ю., Бэкон К.М., Уозерспун А.С., Мюллер-Хермелинк Х.К., Адам П., Донг Х.И., де Йонг Д., Ли И., Вэй Р., Гонг Х., Ву К., Ранальди Р., Готери Г., Пилери SA, Ye H, Hamoudi RA, Liu H, Radford J, Du MQ (2006) Chlamydia psittaci по-разному связаны с MALT-лимфомой придатков глаза в различных географических регионах. J Pathol 209 : 344–351, doi:10.1002/path.1984

      CAS Статья Google ученый

    • Daian CM, Wolff AH, Bielory L (2000)Роль атипичных организмов при астме. Allergy Asthma Proc 21 : 107–111, doi:10.2500/108854100778250860

      CAS Статья Google ученый

    • Феррери А.Дж., Гвидобони М., Понзони М., Де Консилиис С., Дель’Оро С., Флейшхауэр К., Каггиари Л., Леттини А.А., Дал Чин Э., Иери Р., Фрески М., Вилла Э., Бойокки М., Дольчетти Р. ( 2004) Доказательства связи между Chlamydia psittaci и лимфомами придатков глаза. J Natl Cancer Inst 96 : 586–594, doi:10.1093/jnci/djh202

      Статья Google ученый

    • Ferreri AJ, Ponzoni M, Guidoboni M, De Conciliis C, Resti AG, Mazzi B, Lettini AA, Demeter J, Dell’Oro S, Doglioni C, Villa E, Boiocchi M, Dolcetti R (2005) Регрессия лимфома придатков глаза после Chlamydia psittaci — эрадикационная антибиотикотерапия. J Clin Oncol 23 : 5067–5073, doi:10.1200/JCO.2005.07.083

      Артикул Google ученый

    • Феррери А.Дж., Понзони М., Гвидобони М., Рести А.Г., Полити Л.С., Кортелаццо С., Деметер Дж., Заллио Ф., Пальмас А., Мути Г., Догнини Г.П., Пасини Э., Леттини А.А., Саккетти Ф., Де Консилиис С., Doglioni C, Dolcetti R (2006)Бактериально-эрадикационная терапия доксициклином при MALT-лимфоме глазных придатков: многоцентровое проспективное исследование. J Natl Cancer Inst 98 : 1375–1382, doi:10.1093/jnci/djj373

      CAS Статья Google ученый

    • Hardegger D, Nadal D, Bossart W, Altwegg M, Dutly F (2000) Быстрое обнаружение Mycoplasma pneumoniae в клинических образцах с помощью ПЦР в реальном времени. J Microbiol Methods 41 : 45–51, doi:10.1016/S0167–7012(00)00135-4

      CAS Статья Google ученый

    • Isaacson PG, Du MQ (2004) MALT-лимфома: от морфологии к молекулам. Nat Rev Рак 4 : 644–653, doi:10.1038/nrc1409

      CAS Статья пабмед Google ученый

    • Lecuit M, Abachin E, Martin A, Poyart C, Pochart P, Suarez F, Bengoufa D, Feuillard J, Lavergne A, Gordon JI, Berche P, Guillevin L, Lortholary O (2004) Иммунопролиферативное заболевание тонкой кишки, ассоциированное с Campylobacter jejuni . N Engl J Med 350 : 239–248

      CAS Статья Google ученый

    • Littman AJ, Jackson LA, Vaughan TL (2005) Chlamydia pneumoniae и рак легких: эпидемиологические данные. Эпидемиол-биомаркеры рака Предыдущая 14 : 773–778

      CAS Статья Google ученый

    • Pehlivan M, Itirli G, Onay H, Bulut H, Koyuncuoglu M, Pehlivan S (2004) Does Mycoplasma sp. играют роль в мелкоклеточном раке легкого? Рак легкого 45 : 129–130, doi:10.1016/j.luncan.2004.01.007

      Статья Google ученый

    • Wotherspoon AC, Doglioni C, Diss TC, Pan L, Moschini A, de Boni M (1993) Регрессия первичной В-клеточной лимфомы желудка низкой степени злокачественности из лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой, после эрадикации Helicobacter pylori . Ланцет 342 : 575–577, doi:10.1016/0140–6736(93)-F

      CAS Статья Google ученый

    • Е. Х., Лю Х., Аттигалле А., Уотерспун А.С., Николсон А.Г., Шарлотта Ф., Леблон В., Спейт П., Гудлаг Дж., Лаверн-Слов А., Мартин-Суберо Дж.И., Зиберт Р., Доган А., Исааксон П.Г., Du MQ (2003)Вариабельные частоты t(11;18)(q21;q21) при MALT-лимфомах разных локализаций: значительная ассоциация с окрашиванием CagA H pylori при желудочной MALT-лимфоме. Кровь 102 : 1012–1018, doi: 10.1182/blood-2002-11-3502

      CAS Статья Google ученый

    • Моноциты крови человека поддерживают персистенцию, но не репликацию внутриклеточного патогена C. pneumoniae | BMC Immunology

      Среда для культивирования клеток и реагенты

      Фосфатно-солевой буфер (PBS), минимальная основная среда Игла (MEM) GlutaMAX, раствор гентамицина/амфотерицина В были получены от Invitrogen (Lofer, Австрия).RPMI-1640, заменимая аминокислота MEM, мужская сыворотка AB человека (стерильно отфильтрованная), циклогексимид, 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота (HEPES), фетальная бычья сыворотка (FBS) и липополисахарид (LPS). ) из E. coli (055:B5, очищено гель-фильтрацией) были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). Моноклональное антитело (мАт) против CD45, конъюгированное с флуоресцеин-изотиоцианатом (FITC), конъюгированное с R-фикоэритрином (РЕ) моноклональное антитело против CD14 и соответствующие контрольные антитела IgG были получены от Becton Dickinson (Вена, Австрия).

      Размножение

      C. pneumoniae

      C. pneumoniae Штамм CWL-029 был получен из Американской коллекции типовых культур (ATCC, VR-1310) и размножен в клетках HEp-2 (ATCC, CCL23), как сообщалось ранее. [22],[37],[38]. Вкратце, клетки HEp-2 пассировали в среде Eagle’s MEM GlutaMAX с добавлением 10 мкг/мл гентамицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина B, 1 об.% заменимых аминокислот MEM и 10 об.% инактивированной нагреванием FBS. Конфлюэнтные монослои инфицировали C.pneumoniae и выращенных в описанной выше среде, содержащей 1 мкг/мл циклогексимида, но без антибиотиков. Клетки вращали при 1700 g в течение 1 часа при 35°C для повышения инфекционности. Через 72 часа после заражения (hpi) при 35°C и 5% CO 2 монослой клеток разрушали с помощью клеточного скребка и шариков из диоксида циркония. Хламидийные ЭТ получали последовательным центрифугированием лизатов при 600 g (10 мин) и 30 000 g (1 ч; 4°C). Осажденные ЭТ суспендировали в буфере сахароза-фосфат-глутаминовая кислота (0.2 М сахарозы, 3,8 мМ KH 2 PO 4 , 7,2 мМ Na 2 HPO 4 , 5 мМ L-глутаминовой кислоты, pH 7,4) и хранили при -80°C. Количество единиц, образующих хламидийные включения (IFU) на мл, определяли путем титрования инфекционности EB в клетках HEp-2 в течение 48 ч при 35 °C с последующим иммунофлуоресцентным окрашиванием, как описано ниже. Чтобы исключить контаминацию микоплазмой, клеточные культуры и запасы хламидий регулярно тестировали с использованием набора для обнаружения микоплазмы Venor™GeM (Minerva Biolabs, Берлин, Германия).

      Выделение и культивирование моноцитов

      РВМС были выделены из камер системы восстановления лейкоцитов (LRS) устройства для сбора крови TrimaAccel® после одобрения комитетом по этике Медицинского университета Вены, и от всех участников было получено письменное информированное согласие (ECS2177/2013). ). Кровь из камер LRS разбавляли 1:8 (об./об.) PBS, содержащим 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (PBS/EDTA), и РВМС обогащали центрифугированием в градиенте фиколла. Моноциты выделяли путем отрицательного истощения с помощью набора для выделения моноцитов II (Miltenyi Biotec, Бергиш-Гладбах, Германия), что давало >80% CD14-положительных клеток, что подтверждается проточной цитометрией.Жизнеспособность составляла >95%, что определялось исключением 7-ADD.

      Моноциты ресуспендировали в концентрации 4 × 10 5 /мл в бессывороточной среде RPMI-1640 с добавлением 20 мМ HEPES и культивировали, как описано [39]. Аликвоты по 0,5 мл/лунку суспензии моноцитов высевали на 24-луночные плоскодонные планшеты для тканевых культур (Corning Incorporated, Нью-Йорк, США). Через 3 часа при 37°C монослой моноцитов осторожно промывали бессывороточным RPMI-1640 для удаления неприлипших клеток. Адгезивные моноциты выдерживали в полной среде RPMI-1640, содержащей 20 мМ HEPES и 10 об.% человеческой сыворотки AB, в течение дополнительных 24 часов при 37°C.

      Инфекция прикрепленных моноцитов

      Прикрепленные моноциты инокулировали 2 × 10 3 или 2 × 10 4 хламидийных ЕД/лунку, соответственно, или 1 нг/мл ЛПС (положительный контроль) в конечном объеме 0,5 мл среды полной. Для инфицирования клетки центрифугировали 30 мин при 600 g и инкубировали при 37°C в 5% CO 2 . Кумулятивные культуральные супернатанты собирали через 3, 6, 24 и 48 ч соответственно без замены свежей средой, центрифугировали при 600 g в течение 5 мин при 4°C и хранили при -80°C до количественного определения цитокинов.Имитация контроля была подготовлена ​​после процедуры размножения, сбора и очистки EBs [40], [41], но в отсутствие хламидийной инфекции.

      Анализ восстановления

      Монослой моноцитов, подвергнутый воздействию C. pneumoniae в течение 6 и 48 часов, промывали PBS, клетки соскребали и встряхивали с шариками диоксида циркония. EB получали из лизатов, как описано выше, и пассировали на клетки HEp-2. При 48 HPI клетки HEp-2 фиксировали и окрашивали для иммунофлуоресценции, как описано.

      Выделение и количественная оценка ДНК

      Адгезивные моноциты, инфицированные C. pneumoniae в течение 6 и 48 ч, или неинфицированные клетки промывали PBS и подсчитывали клетки на планшетах перед выделением ДНК. Тотальную геномную ДНК выделяли и очищали с использованием набора QIAmp Mini DNA (Qiagen, Hilden, Germany). Очищенную ДНК количественно определяли при 485/530 нм с использованием анализа Quant-iTdsDNA HS и флуорометра Qubit™ (Invitrogen, Лофер, Австрия).

      Количественная ПЦР в реальном времени

      C.pneumoniae были количественно определены с помощью количественной ПЦР в реальном времени, нацеленной на последовательность из 222 п.н., присутствующую на Chlamydia 16S рДНК. Олигонуклеотидные праймеры и зонды TaqMan были синтезированы компанией Microsynth AG (Балгач, Швейцария) и использованы, как подробно описано ранее [42]. ОТ-ПЦР проводили в конечном объеме 20 мкл, включая 1x Master Mix и полимеразу Taq (Mastermix 16S, Molzym, Бремен, Германия), прямой праймер (0,75 мкМ), обратный праймер (0,75 мкМ), зонд FAM-TAMRA (0 .75 мкМ) и 2 нг ДНК. Амплификацию и детекцию проводили в течение 10 минут при 95°C, затем 50 циклов по 10 с при 95°C и 65 с при 60°C. Стандарты известной концентрации (10 1 , 10 2 , 10 3 , 10 4 , 10 5 и 10 5 и 10 6 мкл) готовили из амплифицированных PCR 47 копий 16S 4NA. pneumoniae с помощью обычной ПЦР и очищены с помощью набора QIAmp Mini DNA в соответствии с инструкциями производителя. Образцы анализировали в трех повторностях, и все реакции проводились с использованием системы iCycler IQ (BioRad, Вена, Австрия).

      Выявление внутриклеточных патогенов ДНК-микрочипом

      В дополнение к ОТ-ПЦР был разработан прототип олигонуклеотидного микрочипа. Амплификацию и мечение ДНК проводили с помощью одной универсальной пары праймеров, направленной на конкретную область гена 16S рРНК. Гибридизацию проводили с новыми зондами для Bartonella, Bordetella, Chlamydia и Mycoplasma , которые были разработаны и модифицированы, как описано [23], [43]. Четыре повтора каждого зонда в концентрации 50 мкМ были напечатаны на силилированных предметных стеклах с реактивными альдегидными группами (CSS-100 Silylated Slides; CEL Associates, Техас, США) с помощью контактного матричного устройства Omnigrid от GeneMachines (Сан-Карлос, Калифорния, США). со штифтами MP 3 (TeleChem, Саннивейл, Калифорния, США), что приводит к размеру пятна 100 мкм.Зонд контроля гибридизации (5’-TTA AAA CGA CGG CCA GTG AGC) наносили на матрицу с применением тех же условий, что и для зондов захвата мишени. Амплификацию ДНК и удлинение праймеров проводили в соответствии с [23] с модификациями, подробно описанными в дополнительном файле 1. Слайды сканировали с помощью микрочипового сканера Axon Genepix 4000A (Axon, Юнион-Сити, Калифорния) и данные анализировали, как описано [23]. .

      Рамановская микроспектроскопия

      Моноциты, инфицированные C.pneumoniae (2 × 10 4 IFU) культивировали в течение 6 и 48 часов на микропрепаратах со стеклянным дном (толщина 170 мкм; ibidi GmbH, Мюнхен, Германия). Образцы фиксировали 4% параформальдегидом в течение 4 мин и промывали 3 раза PBS. Раман-спектроскопию выполняли с помощью CellTool (Bernried, Германия) с использованием системы Bio-Ram® и программного обеспечения Bio-Ram®. Спектры комбинационного рассеяния 60 клеток на анализ регистрировали с помощью лазера с длиной волны 785 нм (80 мВт) с накопленным временем 3 × 10 с. Данные биологически релевантной области (700–3000 см -1 ) были предварительно обработаны медианным фильтром для снижения шума, нормализация единичного вектора и последующий многомерный анализ данных были выполнены с помощью статистического программного обеспечения Unscrambler X 10.3 (Camo Software, Осло, Норвегия). Мы провели анализ основных компонентов (PCA) с использованием алгоритма NIPALS и перекрестной проверки, которая является обычной процедурой для спектрального анализа данных.

      Количественное определение цитокинов и хемокинов

      Уровни фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α), интерлейкина (IL)-1β, IL-6, IL-12p70, IL-12p40, IL-10, моноцитарного хемотаксического белка ( MCP)-1 (CCL-2), MCP-3 (CCL-7), воспалительный белок макрофагов (MIP)-1α (CCL-3), MIP-1β (CCL-4) и IL-8 (CXCL-8) ) определяли в культуральных супернатантах с использованием системы Bio-Plex 200 (Bio-Rad, Вена, Австрия).

      Иммунофлуоресценция

      Инфицированные клетки или моноциты HEp-2 культивировали на микропрепаратах (ibidi GmbH, Мюнхен, Германия) при 6 или 48 HPI, промывали PBS и фиксировали в 0,5 мл метанола в течение 10 мин. Чтобы визуализировать хламидийные включения, клетки окрашивали FITC-конъюгированным mAb против Chlamydia-LPS, а человеческие клетки контрастно окрашивали Evans Blue (Pathfinder, Chlamydia Culture Confirmation System, Bio-Rad, Вена, Австрия). Клетки монтировали в Fluoromount-GTM, содержащем DAPI (Southern Biotech, Бирмингем, Великобритания), и флуоресцентные изображения получали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа Zeiss LSM 700 (Carl Zeiss SAS, Йена, Германия) с использованием 40-кратного масляного объектива/1.3 NA или масляный объектив с увеличением 63x/1,4 NA.

      Проточная цитометрия

      Чистоту и жизнеспособность моноцитов проверяли путем определения CD14-позитивных клеток и исключения 7-аминоактиномицина D (7-AAD). Моноциты окрашивали неконъюгированным 7-AAD (BioLegend, Fell, Германия), FITC-конъюгированным анти-CD45 и PE-конъюгированным CD14 или соответствующим контрольным антителом IgG в PBS с добавлением 2 об.% FBS, 0,1 мас.% азида натрия при 4 °С в течение 30 мин. После одного этапа промывки клетки анализировали на проточном цитометре Beckman Coulter FC 500 (Beckman Coulter, Вена, Австрия) и данные анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc, Ashland, OR).

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.